生物安全与来源:生物安全等级为 2 级(BSL-2),具有人畜共患致病性 —— 对猪等家畜可引起急性败血症、慢性关节炎与皮肤疹块(猪丹毒),对人类可导致局部皮肤类丹毒(多因接触病畜或污染肉类引发)。操作需在生物安全柜内进行,使用后器具需 121℃高压蒸汽灭菌 30 分钟,避免气溶胶扩散。该菌株分离自患病猪的病灶组织,其致病表型与临床常见猪源菌株高度一致,能模拟自然感染状态下的细菌形态与代谢特征,是连接兽医诊疗、人畜共患病防控与基础研究的关键菌株。
形态与培养特性:属于革兰氏阳性杆菌,具有独特的形态特征与培养需求:
显微镜形态:菌体呈细长杆状,直径 0.2-0.4μm,长度 1-2μm,常单个、成对或呈短链状排列,部分菌株在病灶样本或陈旧培养物中可形成分枝状菌丝(类似真菌菌丝,故得名 “丝菌”);无芽孢、无鞭毛,不具备运动能力,革兰氏染色时易出现不均匀着色(需注意与其他革兰氏阳性杆菌区分);
培养要求:需使用营养丰富的培养基,最适培养基为含 5% 脱纤维羊血的脑心浸液琼脂(BHI 血琼脂)、胰酪大豆羊血琼脂,无需添加抗生素(对多数抑菌剂敏感);兼性厌氧,最适生长温度 30-37℃(适配猪与人类体温),4℃可缓慢存活,55℃加热 10 分钟即可灭活;
菌落形态:在 BHI 血琼脂平板上,37℃培养 24-48 小时形成直径 0.5-1mm 的小菌落,初期为圆形、表面光滑、半透明,后期变为乳白色不透明,菌落周围呈现α- 溶血(草绿色溶血环,溶血环较窄且不明显,需仔细观察),部分菌株可形成黏液状菌落(与菌株毒力相关)。
生化与致病特性:生化反应具有物种特异性,是鉴别关键:能发酵葡萄糖、乳糖产酸不产气,不发酵蔗糖、甘露醇;触酶试验阴性、氧化酶试验阴性,硫化氢(H?S)产生试验阳性(在含硫酸亚铁的培养基中形成黑色沉淀,核心鉴别特征),不分解尿素;核心致病特性为携带荚膜多糖与溶血素—— 荚膜可抵抗宿主吞噬细胞作用,溶血素能破坏宿主细胞膜,共同介导细菌定植与组织损伤,其致病机制与猪丹毒及人类类丹毒的病理过程一致,可用于致病基因功能研究与疫苗候选抗原筛选。
未开封状态:产品主要以冻干粉(真空密封包装,含 10^5-10^6 CFU / 支活菌) 或斜面培养物(BHI 血琼脂斜面,含成熟菌落) 形式供应:
冻干粉:未开封时需置于 - 20℃以下冷冻保存,长期储存(超过 6 个月)建议放入 - 80℃冰箱,避免反复冻融(反复冻融会导致活菌率下降 70% 以上,破坏致病相关表型),保质期以 ATCC 官方标注为准,通常为 2-3 年;
斜面培养物:未开封时需 4℃冷藏保存,保质期 1 个月,需避免温度波动导致菌落老化。
复苏后状态:复苏后的菌液(BHI 肉汤培养)需 4℃冷藏保存,建议 3-5 天内使用完毕;复苏后的斜面培养物(BHI 血琼脂斜面)4℃冷藏保存,建议 1-2 周内传代一次(该菌代谢较慢,长期冷藏易导致菌体活力下降),使用前需镜检确认菌体形态完整(无肿胀或裂解)。
复苏操作:
冻干粉复苏:无菌环境下(生物安全柜内),向冻干粉中加入 1mL 无菌 BHI 肉汤,轻轻吹吸 5-6 次使粉末完全溶解,转移至无菌试管,37℃培养箱静置培养 24-36 小时(该菌生长较慢,需延长培养时间),待菌液轻度浑浊(OD600 值约 0.3-0.5)、镜检可见典型细长杆菌时,即可用于实验;
斜面培养物复苏:用无菌接种环挑取斜面边缘少量菌落,划线接种至新鲜 BHI 血琼脂平板,37℃培养 24-48 小时,待形成典型 α- 溶血菌落即可使用。
传代培养:在生物安全柜内,用无菌接种环挑取 BHI 血琼脂平板上的单个菌落,划线接种至新鲜 BHI 血琼脂斜面,37℃培养 36 小时,待斜面长满均匀菌落(避免过度培养导致菌丝形成)后,4℃冷藏保存;传代次数不超过 4 代,避免长期传代导致致病基因丢失或生化特性漂移。
应用操作:
兽医诊疗领域:作为阳性对照,验证猪丹毒病诊断方法(如 PCR 检测、血清凝集试验)的准确性,确保病猪快速确诊;用于猪丹毒疫苗效力评估,检测疫苗诱导的抗体对该菌株的中和能力;
人畜共患病研究:模拟人类类丹毒感染模型(如细胞侵袭实验),研究细菌跨物种传播的分子机制,筛选阻断感染的关键靶点;
临床微生物检测:作为对照菌株,验证人类类丹毒感染样本的鉴定方法(如 H?S 产生试验、质谱检测),避免与其他革兰氏阳性杆菌(如李斯特菌)混淆;
药敏测试:依据 CLSI 兽医微生物标准,用于抗猪丹毒药物(如青霉素、阿莫西林)的敏感性测试,校准药敏检测设备,指导临床用药方案制定。


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