生物安全与来源：生物安全等级为 1 级（BSL-1），无致病性，属于非致病肠道菌株，常规实验室规范操作（超净台接种、无菌耗材使用）下，对操作人员及环境无�：�。该菌株分离自健康人类肠道，经百年验证，其生长速率、生化反应、对物理化学因素的敏感性均保持绝对稳定，能精准模拟自然环境中 “非致病指示菌” 的行为特征，是连接微生物检测方法标准化与实际质控场景的核心参照。
形态与培养特性：属于革兰氏阴性短杆菌，具有肠杆菌科典型形态与高度可重复性培养特征：
显微镜形态：菌体呈短杆状，直径 0.5-0.8μm，长度 1.0-2.0μm，常单个或成对排列，无芽孢，部分菌株具有周生鞭毛（运动能力温和且均一），革兰氏染色呈均匀红色（无着色不均，染色结果可作为微生物染色操作的 “标准对照”）；
培养要求：对营养需求极低，在普通营养琼脂（NA）、胰酪大豆琼脂（TSA）、麦康凯琼脂、乳糖发酵培养基中均能快速且均一生长；兼性厌氧，最适生长温度 37℃（与多数微生物检测培养温度一致），可耐受 10-45℃温度范围，生长速率稳定（37℃培养 16 小时菌落直径达 1.5-2mm，24 小时达 2-3mm），无延迟生长期，不同实验室、不同批次培养结果差异率低于 1%，确保计数结果的可比性；
菌落形态：在 TSA 平板上，形成圆形、表面光滑湿润、边缘整齐、乳白色半透明至不透明菌落（大小均一，无黏液状变异）；在麦康凯琼脂上，因发酵乳糖产酸，菌落呈鲜艳粉红色（颜色深浅一致，无褪色或变色现象）；在乳糖发酵培养基中，产酸产气能力稳定（培养 24 小时内，倒置小管内气泡体积占 1/2 以上），且菌液浑浊度与菌体浓度呈严格线性关系（可作为浊度法计数的标准曲线参照），是微生物计数实验的 “理想指示形态”。
生化与生理特性：生化反应具有 “教科书级” 稳定性，是微生物鉴定教学与方法验证的金标准：能发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖、甘露醇产酸产气（发酵时间固定，葡萄糖发酵 12 小时内产酸，乳糖发酵 24 小时内产酸）；触酶试验阳性（反应快速，10 秒内出现气泡）、氧化酶试验阴性（结果明确，无假阳性）；吲哚试验阳性、甲基红试验阳性、V-P 试验阴性、柠檬酸盐利用试验阴性（IMViC 试验结果严格为 “++--”，无任何批次变异）；不产生硫化氢，不分解尿素，对常用消毒剂（如含氯消毒剂、75% 乙醇）的敏感性稳定（含氯消毒剂 500mg/L 作用 30 秒即可杀灭，可作为消毒效果验证的 “标准靶菌”）。
未开封状态：产品主要以冻干粉（真空密封包装，含 10^8-10^9 CFU / 支活菌，含计数专用保护剂） 或标准化菌悬液（含 20% 甘油，10^6 CFU/mL，-80℃专用，计数误差≤5%） 形式供应：
冻干粉：未开封时需置于 - 20℃以下冷冻保存，长期储存（超过 2 年）建议放入 - 80℃冰箱，严禁反复冻融（反复冻融会使活菌率下降 40% 以上，破坏计数稳定性）；保质期以 ATCC 官方标注为准，通常为 5 年（专用保护剂可维持菌体均一性，解冻后活菌分布均匀）；
标准化菌悬液：未开封时需直接置于 - 80℃冷冻保存，不可室温或冷藏放置，保质期 2 年；解冻时需 37℃水浴快速溶解（1-2 分钟），解冻后需轻轻颠倒混匀 3 次（避免菌体沉淀），一次性使用，剩余菌液需灭菌后丢弃，不可再次冷冻。
复苏后状态：复苏后的菌液（TSB 肉汤培养）需 2-8℃冷藏保存，建议 7 天内使用完毕（因该菌株代谢稳定，冷藏期长于普通大肠杆菌）；复苏后的斜面培养物（TSA 斜面）需 2-8℃冷藏保存，建议 3 周内传代一次，传代时需使用无抗菌药物的新鲜培养基，避免营养成分差异影响生长速率；使用前需通过涂片镜检（确认菌体形态正常、无杂菌）及平板计数（验证活菌浓度与理论值偏差≤10%），确保菌株符合计数实验要求。
复苏操作：
冻干粉复苏：无菌环境下（超净台内），向冻干粉中加入 1mL 无菌生理盐水或 TSB 肉汤，轻轻吹吸 5-6 次使粉末完全溶解（避免产生气泡），转移至含 9mL 无菌生理盐水的试管中，混匀后制成 10^-1 稀释液，可根据实验需求进一步梯度稀释（如 10^-3、10^-5 稀释液，用于平板计数）；取适宜稀释度菌液 0.1mL 涂布于 TSA 平板，37℃培养 24 小时，计数菌落数（理论菌落数与稀释度呈严格对应关系）；
标准化菌悬液复苏：从 - 80℃取出后立即 37℃水浴解冻，轻轻颠倒混匀，无需稀释即可直接用于实验（浓度已标定为 10^6 CFU/mL，适配消毒效力测试、无菌验证等场景）。
传代培养：在超净台内，用无菌接种环蘸取少量复苏菌液，在 TSA 平板上分区划线（确保单菌落分离），37℃培养 24 小时；挑取形态典型（圆形、乳白色、光滑）的单菌落，转接至 TSA 斜面，37℃培养 24 小时后 2-8℃冷藏保存；传代次数严格控制在 5 代以内（避免长期传代导致生长速率变化），每次传代后需通过平板计数验证菌体浓度稳定性，确保符合实验要求。
应用操作：
食品卫生检测：作为核心指示菌株，用于食品（乳制品、肉制品、饮用水）中菌落总数、大肠菌群计数方法的验证与质控，如通过该菌株绘制标准菌落计数曲线，校准实验室计数操作，确保食品微生物污染检测结果准确，保障食品安全；
药品 / 化妆品无菌验证：依据《中国药典》《美国药典》标准，用于无菌产品（注射剂、眼用制剂、化妆品）的无菌检查阳性对照，验证无菌操作环境与检测方法的有效性，避免无菌产品污染风险；
消毒产品效力测试：作为标准靶菌，用于评价含氯消毒剂、过氧乙酸、紫外线等消毒方式的杀菌效果，通过检测消毒前后该菌株的活菌数，计算杀灭率（要求杀灭率≥99.9%），确保消毒产品符合国家标准；
教学与方法标准化：在微生物教学中，用于演示平板计数法、革兰氏染色、生化反应等基础操作，其稳定的特性可帮助学习者掌握标准实验技能；同时可用于实验室新检测方法（如快速微生物计数仪）的验证，确保方法的准确性与重复性，推动微生物检测方法标准化。
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