生物安全与来源：生物安全等级为 2 级（BSL-2），具有特定致病性 —— 对婴幼儿（尤其是早产儿、低体重儿）可引起败血症、脑膜炎及坏死性小肠结肠炎，对成人多为无症状定植，操作需在生物安全柜内进行，使用后器具需 121℃高压蒸汽灭菌 30 分钟，避免交叉污染。该菌株分离自受污染的婴幼儿配方奶粉样本，其生物学特性与食品污染来源的克罗诺杆菌高度一致，能模拟自然污染场景下的细菌形态、代谢特征及耐药表型，是食品质控与临床感染研究的核心参照菌株。
形态与培养特性：属于革兰氏阴性短杆菌，归为肠杆菌科，具有独特的形态与选择性培养特征：
显微镜形态：菌体呈短杆状，直径 0.5-0.8μm，长度 1.0-2.0μm，常单个或成对排列，无芽孢，具有周生鞭毛（具备运动能力，30℃培养时运动性显著，37℃时减弱），革兰氏染色呈均匀红色（无着色不均，区别于其他革兰氏阴性杆菌）；
培养要求：兼性厌氧，对营养需求中等，最适培养基为克罗诺杆菌选择性培养基（如 DFI 培养基、ESIA 培养基）、胰酪大豆琼脂（TSA）及麦康凯琼脂，可耐受一定渗透压（在含 7.5% NaCl 的培养基中可缓慢生长，区别于多数肠杆菌科细菌）；最适生长温度 30-37℃（适配食品储存与人体体温环境），可耐受 5-45℃宽温度范围，生长速度中等，37℃培养 24-48 小时形成明显菌落，在低温环境（4℃）下可存活数月（体现食品冷藏储存污染风险）；
菌落形态：在 DFI 选择性培养基上，37℃培养 24 小时后形成直径 1-2mm 的蓝色菌落（因分解特定底物产生荧光，紫外灯下可见蓝色荧光，核心鉴别特征）；在麦康凯琼脂上，因不发酵乳糖，菌落呈无色透明至乳白色（区别于发酵乳糖的大肠杆菌）；在 TSA 平板上，形成圆形、表面光滑湿润、边缘整齐、乳白色不透明菌落（直径 1.5-2.5mm），部分菌落中心略带黄色，可通过选择性培养基上的菌落特征快速区分于其他食品污染菌（如沙门氏菌、李斯特菌）。
生化与致病特性：生化反应具有物种特异性，是克罗诺杆菌鉴定的核心标志：能发酵葡萄糖、D - 甘露糖、蔗糖产酸不产气，不发酵乳糖、山梨醇（与大肠杆菌等肠杆菌科细菌差异显著）；触酶试验阳性、氧化酶试验阴性（肠杆菌科共性）；吲哚试验阴性、甲基红试验阳性、V-P 试验阳性、柠檬酸盐利用试验阳性（IMViC 试验结果为 “-+++”，独特生化模式）；能产生脱氧核糖核酸酶（DNase 试验阳性），不产生硫化氢，分解尿素能力弱；核心致病特性为携带荚膜多糖、黏附素及溶血素—— 荚膜多糖可抵抗宿主吞噬细胞作用，黏附素能促进细菌在婴幼儿肠道黏膜定植，溶血素可破坏宿主细胞膜，共同介导对婴幼儿的严重感染，其致病机制与临床婴幼儿感染病例高度一致，是研究克罗诺杆菌致病基因功能的理想模型菌株。
未开封状态：产品主要以冻干粉（真空密封包装，含 10^6-10^7 CFU / 支活菌，含食品微生物专用保护剂） 或标准化甘油菌悬液（20% 甘油，10^5 CFU/mL，-80℃专用） 形式供应：
冻干粉：未开封时需置于 - 20℃以下冷冻保存，长期储存（超过 1 年）建议放入 - 80℃冰箱，严禁反复冻融（反复冻融会使活菌率下降 70% 以上，破坏其耐渗透压及低温存活特性）；保质期以 ATCC 官方标注为准，通常为 3 年（专用保护剂可维持菌株食品污染相关表型稳定）；
甘油菌悬液：未开封时需直接置于 - 80℃冷冻保存，不可室温或冷藏放置（室温暴露 30 分钟可导致菌体活力大幅下降），保质期 2 年；解冻时需 37℃水浴快速溶解（1-2 分钟），解冻后需一次性使用，剩余菌液需灭菌后丢弃，不可再次冷冻。
复苏后状态：复苏后的菌液（TSB 肉汤培养）需在 2-8℃冷藏保存，建议 3-5 天内使用完毕（该菌代谢活跃，长期冷藏易积累代谢废物影响致病表型）；复苏后的斜面培养物（TSA 斜面）需 2-8℃冷藏保存，建议 1-2 周内传代一次，传代时需使用无抗菌药物的新鲜培养基（避免药物残留诱导耐药性），同时需在 30℃培养以保持鞭毛运动性（37℃长期培养易导致鞭毛丢失）；使用前需通过涂片镜检（确认菌体形态正常、无杂菌）及选择性培养基培养（验证 DFI 培养基上的蓝色荧光菌落特征），确保菌株符合食品质控与致病研究要求。
复苏操作：
冻干粉复苏：无菌环境下（生物安全柜内），向冻干粉中加入 1mL 无菌胰酪大豆肉汤（TSB），轻轻吹吸 5-6 次使粉末完全溶解（避免产生气泡），转移至无菌试管，30℃培养箱振荡培养（150-180rpm）24 小时（30℃培养可更好保留运动性与致病相关表型）；待菌液呈均匀浑浊状（OD600 值约 0.4-0.6，处于对数生长期）、镜检可见典型短杆菌（带鞭毛）时，即可用于实验；
甘油菌复苏：从 - 80℃取出甘油菌后，立即 37℃水浴解冻，用无菌枪头吸取 100μL 菌液接种至含 5mL TSB 肉汤的无菌试管中，30℃振荡培养 24 小时，待菌液浑浊后使用，无需再次稀释（浓度已标准化，适配食品污染模拟检测）。
传代培养：在生物安全柜内，用无菌接种环蘸取少量复苏菌液，在 DFI 选择性平板上分区划线（确保单菌落分离，同时验证选择性培养特征），30℃培养 24 小时；待平板形成蓝色荧光单菌落后，挑取形态典型（圆形、光滑、蓝色）的单菌落，可直接用于实验，或转接至 TSA 斜面，30℃培养 24 小时后，2-8℃冷藏保存；传代次数严格控制在 4 代以内（避免长期传代导致耐渗透压、低温存活等食品污染相关特性丢失），每次传代后需通过 DNase 试验验证菌株特性（确保仍为阳性）。
应用操作：
食品安全质控：作为核心质控菌株，用于婴幼儿配方奶粉、谷物制品等食品中克罗诺杆菌污染检测方法的验证，如评估 DFI 培养基、实时荧光 PCR 检测试剂盒的特异性与灵敏度，通过模拟污染实验（将该菌株添加至无菌奶粉中）验证检测流程的准确性，确保食品出厂前克罗诺杆菌污染筛查可靠；
临床微生物鉴定：作为阳性对照，验证生化鉴定试剂盒（如 API 20E、VITEK 2 GN 卡）、微生物质谱检测系统（MALDI-TOF MS）对克罗诺杆菌的鉴定能力，辅助区分克罗诺杆菌与肠杆菌科其他近缘菌（如肠杆菌属、沙雷氏菌属），避免临床感染病例误判；
致病性研究：在科研领域，用于探索克罗诺杆菌对婴幼儿肠道上皮细胞的黏附与侵袭机制，研究荚膜多糖、溶血素等致病因子的表达调控，或构建动物模型（如新生小鼠感染模型）评估菌株毒力，为婴幼儿克罗诺杆菌感染防控提供理论支持；
药敏测试：依据 CLSI 肠杆菌科药敏标准，用于验证头孢类（头孢曲松）、氨基糖苷类（庆大霉素）、氟喹诺酮类（环丙沙星）等药物对克罗诺杆菌的敏感性测试结果，确定该菌株对不同药物的 MIC 值（如头孢曲松 MIC≤1μg/mL），为临床婴幼儿感染病例用药方案制定提供参考。
客服1