生物安全与来源：生物安全等级为 1 级（BSL-1），无致病性，属于人类肠道正常菌群（非致病菌株），常规实验室规范操作（超净台接种、无菌耗材使用）下，对操作人员及环境无�：Α８镁攴掷胱越】等死喑Φ溃瓯曜蓟嘤渖镅匦裕ㄈ缟に俾�、生化反应）从未发生漂移，活菌浓度标定误差≤3%（远低于普通菌株的 10% 误差），能精准模拟微生物定量检测中 “标准靶菌” 的行为特征，是确保检测结果溯源性与可比性的核心参照。
形态与培养特性：属于革兰氏阴性短杆菌，归为肠杆菌科，具有典型肠道杆菌形态与高可重复性培养特征：
显微镜形态：菌体呈短杆状，直径 0.5-0.9μm，长度 1.0-1.8μm，常单个或成对排列（无长链形成，便于计数），无芽孢，具有周生鞭毛（运动能力温和，不影响平板菌落形态），革兰氏染色呈均匀红色（无着色不均，可作为染色操作的 “标准对照”）；
培养要求：对营养需求极低，在普通营养琼脂（NA）、胰酪大豆琼脂（TSA）、麦康凯琼脂及 LB 琼脂中均能快速且均匀生长；兼性厌氧，最适生长温度 37℃（与多数微生物检测培养温度完全适配），可耐受 10-45℃温度范围，生长速率高度稳定（37℃培养 16 小时菌落直径达 1.8-2.2mm，24 小时达 2.5-3.0mm），无延迟生长期，不同实验室培养结果差异率低于 0.5%；
菌落形态：在 TSA 平板上，形成圆形、表面光滑湿润、边缘整齐、乳白色不透明菌落（大小均一，无黏液状或扁平变异）；在麦康凯琼脂上，因发酵乳糖产酸，菌落呈鲜艳粉红色（颜色深浅一致，无褪色现象）；在乳糖发酵培养基中，产酸产气能力稳定（培养 18 小时内，倒置小管内气泡体积占 1/2 以上），且菌液浊度与活菌浓度呈严格线性关系（OD600 值 0.1 对应 10^8 CFU/mL，可直接作为浊度法计数的标准曲线），是微生物定量实验的 “理想指示形态”。
生化与生理特性：生化反应具有 “计量级” 稳定性，是微生物定量检测方法验证的金标准：能发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖、甘露醇产酸产气（发酵时间固定，葡萄糖 10 小时内产酸，乳糖 20 小时内产酸，无批次差异）；触酶试验阳性（反应快速且剧烈，5 秒内出现密集气泡）、氧化酶试验阴性（结果明确，无假阳性）；吲哚试验阳性、甲基红试验阳性、V-P 试验阴性、柠檬酸盐利用试验阴性（IMViC 试验结果严格为 “++--”，任何条件下无变异）；不产生硫化氢，不分解尿素，对物理化学因素（如温度、渗透压）的敏感性高度一致（55℃加热 10 分钟活菌杀灭率 100%，含氯消毒剂 100mg/L 作用 30 秒杀灭率≥99.99%），可作为消毒效果验证的 “标准计量靶菌”。
未开封状态：产品主要以标准化冻干粉（真空密封包装，含 10^8 CFU / 支活菌，误差≤3%，含计数专用保护剂） 或定值甘油菌悬液（20% 甘油，10^6 CFU/mL，误差≤2%，-80℃专用） 形式供应：
标准化冻干粉：未开封时需置于 - 20℃以下冷冻保存，长期储存（超过 2 年）建议放入 - 80℃冰箱，严禁反复冻融（反复冻融会使活菌率下降 30% 以上，破坏浓度标定精度）；保质期以 ATCC 官方标注为准，通常为 5 年（专用保护剂可维持菌体均一性，解冻后活菌分布均匀，无聚集现象）；
定值甘油菌悬液：未开封时需直接置于 - 80℃冷冻保存，不可室温或冷藏放置（室温暴露 20 分钟可导致菌体活力下降 20%），保质期 2 年；解冻时需 37℃水浴快速溶解（1 分钟内），解冻后需轻轻颠倒混匀 2 次（避免菌体沉淀影响浓度），一次性使用，剩余菌液需灭菌后丢弃，不可再次冷冻。
复苏后状态：复苏后的菌液（TSB 肉汤培养）需在 2-8℃冷藏保存，建议 10 天内使用完毕（该菌株代谢稳定且经特殊驯化，冷藏期长于普通计数菌株）；复苏后的斜面培养物（TSA 斜面）需 2-8℃冷藏保存，建议 3 周内传代一次，传代时需使用无抗菌药物的新鲜培养基（确保营养成分一致，避免影响生长速率）；使用前需通过平板计数（验证活菌浓度与标定值偏差≤5%）及涂片镜检（确认菌体形态正常、无杂菌），确保菌株符合高精度质控要求。
复苏操作：
标准化冻干粉复苏：无菌环境下（超净台内），向冻干粉中加入 1mL 无菌生理盐水（或 TSB 肉汤），轻轻吹吸 6-8 次使粉末完全溶解（避免产生气泡），转移至含 9mL 无菌生理盐水的试管中，混匀后制成 10^-1 稀释液（理论浓度 10^7 CFU/mL），可根据实验需求进一步梯度稀释（如 10^-4、10^-6 稀释液，用于平板计数校准）；取适宜稀释度菌液 0.1mL 涂布于 TSA 平板（每个稀释度 3 个平行平板），37℃培养 24 小时，计数菌落数（3 个平板菌落数差异需≤10%，确保计数精度）；
定值甘油菌悬液复苏：从 - 80℃取出后立即 37℃水浴解冻，轻轻颠倒混匀，无需稀释即可直接用于实验（浓度已标定为 10^6 CFU/mL，适配无菌检查中的阳性对照、消毒效力测试中的定量接种）。
传代培养：在超净台内，用无菌接种环蘸取少量复苏菌液，在 TSA 平板上分区划线（确保单菌落分离，且菌落分布均匀），37℃培养 18-24 小时；待平板形成单菌落后，挑取形态典型（圆形、乳白色、光滑）的单菌落，转接至 TSA 斜面，37℃培养 24 小时后 2-8℃冷藏保存；传代次数严格控制在 3 代以内（避免长期传代导致浓度标定精度丢失），每次传代后需通过平板计数验证活菌浓度稳定性（与初始标定值偏差≤5%），确保菌株符合计量级质控标准。
应用操作：
药品无菌检查：作为《中国药典》《美国药典》推荐的无菌检查阳性对照菌株，用于验证注射剂、眼用制剂、口服固体制剂等药品无菌检测方法的有效性，通过向无菌样品中添加定量该菌株（通常 10-100 CFU / 支），确认培养后能正常检出，避免因方法缺陷导致的无菌漏检；
食品定量检测：用于食品（乳制品、肉制品、饮用水）中菌落总数、大肠菌群定量检测方法的校准，如通过该菌株绘制标准计数曲线，校准实验室平板计数操作的系统误差，确保不同批次、不同样品的计数结果具有可比性；
消毒产品效力验证：作为消毒产品（如医用消毒剂、食品加工消毒剂）杀菌效果验证的标准靶菌，依据国家标准要求，将该菌株定量接种至载体（如不锈钢片、玻璃片），经消毒处理后检测活菌残留量，计算杀灭率，确保消毒产品达到规定的杀菌性能标准；
实验室能力验证：用于微生物检测实验室的能力考核（如盲样测试），通过向实验室发放含该菌株的未知浓度样品，评估实验室定量检测的准确性与精密度，推动实验室检测能力标准化；同时可用于新检测技术（如数字 PCR、流式细胞术）的定量方法验证，建立新型方法与传统平板计数法的溯源关系。
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