生物安全与来源:生物安全等级为 2 级(BSL-2),具条件致病性,常引发口腔及皮肤软组织感染,操作需在生物安全柜内进行,器具使用后需 121℃高压灭菌 30 分钟。菌株分离自临床牙周炎患者病灶,生物学特性与临床分离株高度一致,可模拟自然感染状态下的致病表型。
形态与培养特性:革兰氏阴性短杆菌,具独特腐蚀生长特征:
显微镜形态:菌体细长(0.3-0.5μm×1.0-3.0μm),单个或短链排列,无芽孢、无鞭毛,革兰氏染色呈均匀红色;
培养要求:专性需氧,需含 5%-10% CO?环境,最适培养基为血琼脂、巧克力琼脂(需添加维生素 K?),最适温度 35-37℃,生长缓慢(48-72 小时形成菌落);
菌落形态:血琼脂上形成直径 0.5-1mm 菌落,中心凹陷、边缘不规则(“腐蚀状” 生长,核心鉴别特征),呈灰黄色半透明,无溶血现象。
生化与致病特性:生化反应具特异性:氧化酶阳性、触酶阴性,能分解葡萄糖产酸不产气,不分解乳糖、蔗糖;核心致病特性为含脂多糖与黏附素,可黏附口腔上皮细胞,参与牙周炎病理过程,对青霉素类、头孢类药物敏感,MIC 值稳定(如阿莫西林 MIC 0.25-1μg/mL)。
未开封状态:以冻干粉(真空包装,含 10^6-10^7 CFU / 支,含厌氧菌保护剂)或甘油菌悬液(20% 甘油,-80℃专用)供应:
冻干粉:-20℃以下冷冻保存,长期(>6 个月)建议 - 80℃储存,严禁反复冻融,保质期 2 年;
甘油菌:直接 - 80℃保存,不可室温放置,保质期 1 年,解冻后一次性使用。
复苏后状态:复苏菌液(巧克力琼脂肉汤培养)2-8℃冷藏保存,3-5 天内使用;斜面培养物(巧克力琼脂斜面)2-8℃冷藏,1-2 周传代一次,使用前需镜检确认菌体形态正常。
复苏操作:生物安全柜内,冻干粉加 1mL 无菌巧克力琼脂肉汤溶解,转移至试管,37℃ 5% CO?培养箱培养 48-72 小时,待菌液浑浊、镜检见典型杆菌即可使用。
传代培养:无菌操作下,挑取血琼脂单菌落,划线接种至新鲜巧克力琼脂,37℃ 5% CO?培养 48 小时,斜面培养后 2-8℃冷藏,传代不超过 3 代。
应用操作:
临床质控:用于验证口腔感染样本鉴定方法(如质谱检测、生化试剂盒)准确性;
AST 测试:依据 CLSI 标准,校准阿莫西林、甲硝唑等药物 MIC 值,指导临床用药;
科研教学:用于口腔微生态互作实验,及演示 “腐蚀状” 菌落鉴别操作。


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