生物安全与来源:生物安全等级为 2 级(BSL-2),具致病性,可引发口腔感染并经血行播散,操作需在厌氧手套箱或生物安全柜内进行,器具使用后需 121℃高压灭菌 30 分钟。菌株分离自临床牙周炎患者病灶,生物学特性与临床分离株高度一致,可模拟自然感染状态下的厌氧致病行为。
形态与培养特性:革兰氏阴性厌氧杆菌,具典型梭菌形态:
显微镜形态:菌体呈梭形或杆状(0.5-0.8μm×2.0-5.0μm),两端尖细,常单个或短链排列,无芽孢、无鞭毛,革兰氏染色呈均匀红色(无着色不均);
培养要求:严格厌氧(需 85% N?、10% H?、5% CO?环境),最适培养基为强化梭菌琼脂(RCA)、巧克力厌氧琼脂(添加维生素 K?+ 血红素),最适温度 37℃,生长缓慢(48-72 小时形成菌落);
菌落形态:RCA 平板上呈圆形、表面光滑、边缘整齐的灰白色半透明菌落(直径 1-2mm),质地柔软,挑取时易拉丝,无溶血现象。
生化与耐药特性:生化反应具厌氧特异性:氧化酶阴性、触酶阴性,不发酵葡萄糖、乳糖,能分解蛋白胨产氨(培养基 pH 升高),吲哚试验阳性;核心优势在于抗厌氧菌药敏表型稳定:经 CLSI 标定,对甲硝唑、克林霉素敏感(甲硝唑 MIC 0.25-1μg/mL),对青霉素类(氨苄西林)中度敏感,是临床抗厌氧菌用药质控的可靠参照。
未开封状态:以冻干粉(真空包装,含 10^6-10^7 CFU / 支,含厌氧菌专用保护剂)或厌氧甘油菌悬液(20% 甘油 + 0.05% 半胱氨酸,-80℃专用)供应:
冻干粉:-20℃以下冷冻保存,长期(>6 个月)建议 - 80℃储存,严禁反复冻融(活菌率下降 80% 以上,破坏厌氧特性),保质期 3 年;
甘油菌:直接 - 80℃保存,不可室温暴露(10 分钟即致大量死亡),保质期 2 年,解冻需在厌氧环境中进行。
复苏后状态:复苏菌液(RCA 肉汤培养)需厌氧环境下 4℃冷藏,3-5 天内使用;斜面培养物(RCA 斜面)需厌氧 4℃冷藏,1-2 周传代一次,使用前需镜检确认菌体梭形形态正常。
复苏操作:厌氧手套箱内,冻干粉加 1mL 无菌厌氧肉汤溶解,转移至试管,37℃厌氧培养箱培养 48-72 小时,待菌液浑浊、镜检见典型梭形杆菌即可使用。
传代培养:厌氧环境下,挑取 RCA 平板单菌落划线接种新鲜 RCA 平板,37℃厌氧培养 48-72 小时,斜面保存后厌氧 4℃冷藏,传代≤3 代(避免丢失厌氧特性)。
应用操作:
临床质控:验证口腔厌氧菌鉴定系统(如 VITEK 2 ANC 卡)、质谱检测准确性;
AST 测试:校准甲硝唑、克林霉素等药物 MIC 值,指导临床抗厌氧菌用药;
科研教学:用于口腔菌群互作实验,及演示严格厌氧菌培养与形态鉴别操作。


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