生物安全与来源:生物安全等级为 2 级(BSL-2),具致病性,可引发人类肺炎、支气管炎(尤其免疫低下人群),操作需在生物安全柜内进行,器具使用后需 121℃高压灭菌 30 分钟。菌株分离自临床肺炎患者呼吸道样本,生物学特性与临床及环境(如冷却塔水)分离株高度一致,可模拟自然感染与污染场景下的表型。
形态与培养特性:革兰氏阴性短杆菌,具独特培养需求:
显微镜形态:菌体呈短杆状(0.3-0.5μm×1.0-2.0μm),常单个或成对排列,无芽孢,具极生鞭毛(运动能力弱),革兰氏染色呈均匀红色(易脱色,需严格控制染色时间);
培养要求:专性需氧,需含 2.5%-5% CO?环境,最适培养基为缓冲活性炭酵母提取物琼脂(BCYEα 琼脂,需添加 L - 半胱氨酸与铁离子),最适温度 35-37℃,生长缓慢(3-5 天形成明显菌落),普通营养琼脂上不生长(核心鉴别特征);
菌落形态:BCYEα 琼脂上呈圆形、表面光滑湿润、边缘整齐的灰白色至淡黄色菌落(直径 0.5-1mm),质地柔软,紫外灯下无荧光(区别于嗜肺军团菌),无溶血现象。
生化与耐药特性:生化反应具物种特异性:氧化酶阳性、触酶阳性,不发酵葡萄糖、乳糖等糖类(非发酵菌),不分解尿素,明胶液化试验阴性;核心优势在于药敏表型稳定:经 CLSI 标定,对大环内酯类(阿奇霉素)、氟喹诺酮类(左氧氟沙星)敏感(阿奇霉素 MIC 0.12-0.5μg/mL),对 β- 内酰胺类药物(青霉素)耐药,是临床呼吸道感染用药质控的可靠参照。
未开封状态:以冻干粉(真空包装,含 10^6-10^7 CFU / 支,含专用保护剂)或标准化甘油菌悬液(20% 甘油,10^5 CFU/mL,-80℃专用)供应:
冻干粉:-20℃以下冷冻保存,长期(>6 个月)建议 - 80℃储存,严禁反复冻融(活菌率下降 70% 以上,破坏营养依赖特性),保质期 3 年;
甘油菌:直接 - 80℃保存,不可室温放置(室温暴露 30 分钟致活力下降 50%),保质期 2 年,解冻后一次性使用。
复苏后状态:复苏菌液(BCYEα 肉汤培养)需 2-8℃冷藏,4-6 天内使用;斜面培养物(BCYEα 斜面)需 2-8℃冷藏,2 周内传代一次,使用前需镜检确认菌体形态正常,且在 BCYEα 琼脂上验证生长能力。
复苏操作:生物安全柜内,冻干粉加 1mL 无菌 BCYEα 肉汤溶解,转移至试管,37℃ 5% CO?培养箱培养 3-5 天;待菌液浑浊、镜检见典型短杆菌即可使用。
传代培养:生物安全柜内,挑取 BCYEα 平板单菌落划线接种新鲜 BCYEα 平板,37℃ 5% CO?培养 3-5 天;斜面保存后 2-8℃冷藏,传代≤3 代(避免丢失营养依赖特性)。
应用操作:
临床质控:验证呼吸道样本鉴定系统(如质谱、生化试剂盒)准确性;
AST 测试:校准阿奇霉素、左氧氟沙星等药物 MIC 值,指导临床用药;
环境检测:用于水源中博泽马氟杆菌污染筛查,验证 BCYEα 培养基分离效果;
科研教学:用于致病机制研究,及演示非发酵菌培养与鉴别操作。


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