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ATCC12976嗜热脂肪芽孢杆菌Geobacillus stearothermophilus

一、产品名称官方名称为 ATCC 12976 嗜热脂肪芽孢杆菌,拉丁学名为Geobacillus stearothermophilus,由美国典型培养物保藏中心(ATCC)保藏。作为全球公认的高温灭菌效果验证标准菌株,其芽孢耐热性稳定、萌发率可控,核心用于医药(注射剂、医疗器械)、食品(罐头、乳制品)行业灭菌工艺验证,同时在微生物检测方法校准及

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一、产品名称
官方名称为 ATCC 12976 嗜热脂肪芽孢杆菌,拉丁学名Geobacillus stearothermophilus,由美国典型培养物保藏中心(ATCC)保藏。作为全球公认的高温灭菌效果验证标准菌株,其芽孢耐热性稳定、萌发率可控,核心用于医药(注射剂、医疗器械)、食品(罐头、乳制品)行业灭菌工艺验证,同时在微生物检测方法校准及耐热机制研究中具有关键价值,是连接灭菌质量控制与工业生产安全的重要对照菌株。
二、产品特点
  1. 生物安全与来源:生物安全等级为 1 级(BSL-1),无致病性,广泛存在于土壤、堆肥等高温环境,常规超净台操作即可,器具使用后需高压灭菌。菌株分离自高温堆肥样本,其芽孢耐热特性与工业灭菌场景中常见的耐热菌高度一致,可精准模拟灭菌过程中芽孢的存活与死亡行为。

  1. 形态与培养特性:革兰氏阳性芽孢杆菌,具典型耐热菌特征:

  • 显微镜形态:营养体呈杆状(0.6-1.0μm×2.0-5.0μm),单个或短链排列,无鞭毛(非运动型),革兰氏染色呈均匀紫色;芽孢椭圆形(0.8-1.2μm×1.5-2.0μm),位于菌体中央或次末端,芽孢壁厚实(耐热核心结构);

  • 培养要求:兼性厌氧,最适培养基为营养琼脂、胰酪大豆琼脂(TSA),最适生长温度 55-60℃(耐高温特性显著,30℃以下生长缓慢),生长速度中等(24-48 小时形成菌落),芽孢在 80-121℃仍可存活(121℃湿热灭菌需 15-30 分钟杀灭);

  • 菌落形态:TSA 平板(55℃培养)上呈圆形、表面粗糙干燥、边缘不整齐的乳白色不透明菌落(直径 2-3mm),质地坚韧,挑取时易呈丝状物(区别于普通芽孢杆菌),无溶血现象。

  1. 生化与应用特性:生化反应具物种特异性:氧化酶阳性、触酶阳性,能发酵葡萄糖、蔗糖产酸产气,不发酵乳糖、甘露醇;核心优势在于芽孢稳定性:芽孢萌发率≥95%,耐热参数(D 值:121℃时为 1.5-3.0 分钟,Z 值:10-15℃)高度标准化,经 ISO、USP 等权威机构认可,是评估湿热灭菌、干热灭菌、辐射灭菌效果的 “金标准靶标”,同时对常见消毒剂(如含氯消毒剂)敏感性稳定,可用于消毒效果验证。

三、储存环境
  1. 未开封状态:以芽孢冻干粉(真空包装,含 10^8-10^9 CFU / 支,含芽孢保护剂)或标准化芽孢悬液(20% 甘油,10^6 CFU/mL,-20℃专用)供应:

  • 芽孢冻干粉:-20℃以下冷冻保存,长期(>1 年)建议 - 80℃储存,严禁反复冻融(活菌率下降 30% 以上,破坏芽孢耐热性),保质期 5 年;

  • 芽孢悬液:直接 - 20℃保存,不可室温放置(室温暴露 24 小时致芽孢萌发率下降 20%),保质期 2 年,解冻后轻轻混匀,一次性使用。

  1. 复苏后状态:复苏菌液(TSB 肉汤 55℃培养)需 4℃冷藏,7 天内使用完毕;斜面培养物(TSA 斜面)需 4℃冷藏,3 周内传代一次,传代时需 55℃培养(避免低温导致芽孢形成能力下降),使用前需镜检确认芽孢形态正常,并通过耐热实验(80℃处理 10 分钟后计数)验证耐热性。

四、使用方法
  1. 复苏操作:超净台内,芽孢冻干粉加 1mL 无菌 TSB 肉汤溶解,55℃振荡培养 24-48 小时;待菌液浑浊、镜检见大量营养体与芽孢,且平板计数萌发率≥95% 时,即可使用;若用于灭菌验证,需将芽孢悬液制备成浓度 10^5-10^6 CFU/mL 的菌片或菌液。

  1. 传代培养:挑取 TSA 平板(55℃培养)单菌落,划线接种新鲜 TSA 平板,55℃培养 24-48 小时;斜面保存后 4℃冷藏,传代≤5 代(避免长期传代导致芽孢耐热性漂移),每次传代后需通过 D 值测定验证芽孢耐热参数。

  1. 应用操作

  • 灭菌验证:用于医药器械湿热灭菌(121℃)、食品罐头商业灭菌(115℃)效果验证,通过灭菌后芽孢培养判断杀灭率(要求杀灭率≥99.999%);

  • 检测校准:校准微生物计数方法(如平板计数法、快速荧光计数法),确保高温环境样本检测准确性;

  • 科研教学:用于芽孢耐热机制研究(如芽孢皮层结构分析),及微生物实验中 “芽孢菌培养与耐热性检测” 教学演示;

  • 消毒测试:评估高温消毒剂(如过氧乙酸)对耐热菌的杀灭效果,为消毒工艺优化提供参照。



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