生物安全与来源:生物安全等级为 1 级(BSL-1),无致病性,分离自温泉沉积物(高温低氧环境),与工业中低温灭菌场景常见耐热菌特性高度一致,可精准模拟中低温条件下芽孢的存活行为,常规超净台操作即可,器具使用后需高压灭菌。
形态与培养特性:革兰氏阳性芽孢杆菌,具物种典型特征且有场景适配性:
显微镜形态:营养体杆状(0.5-0.9μm×1.8-4.0μm),单个或短链排列,无鞭毛,革兰氏染色呈均匀紫色;芽孢椭圆形(0.7-1.1μm×1.4-1.8μm),位于菌体次末端,芽孢壁厚度略薄于 ATCC12976(适配中低温耐热特性);
培养要求:兼性厌氧,最适培养基为营养琼脂、TSA,最适生长温度 50-55℃(较 ATCC12976 低 5℃,适配中低温培养场景),30℃以下生长极缓慢,生长速度中等(24-48 小时形成菌落),芽孢在 70-115℃存活(115℃湿热灭菌需 10-20 分钟杀灭,较 ATCC12976 更易被中低温灭菌灭活);
菌落形态:TSA 平板(50℃培养)上呈圆形、表面较光滑(区别于 ATCC12976 的粗糙菌落)、边缘整齐的乳白色半透明菌落(直径 1.5-2.5mm),质地较软,挑取时丝状物短,无溶血现象。
生化与应用特性:生化反应具物种特异性:氧化酶阳性、触酶阳性,发酵葡萄糖、蔗糖产酸产气,不发酵乳糖、甘露醇;核心优势在于中低温适配的芽孢参数:芽孢萌发率≥96%,耐热参数(D 值:115℃时为 1.0-2.0 分钟,Z 值:8-12℃)经 USP、EP 认可,更适配低温蒸汽甲醛灭菌、过氧化氢低温等离子灭菌等中低温工艺验证,同时对中低温消毒剂(如低温过氧化氢溶液)敏感性稳定,可用于特殊消毒场景测试。
未开封状态:以芽孢冻干粉(真空包装,含 10^8-10^9 CFU / 支,含芽孢保护剂)或标准化芽孢悬液(20% 甘油,10^6 CFU/mL,-20℃专用)供应:
芽孢冻干粉:-20℃以下冷冻保存,长期(>1 年)建议 - 80℃储存,严禁反复冻融(活菌率下降 25% 以上,破坏中低温耐热特性),保质期 5 年;
芽孢悬液:直接 - 20℃保存,室温暴露 24 小时致芽孢萌发率下降 15%,保质期 2 年,解冻后轻轻混匀,一次性使用。
复苏后状态:复苏菌液(TSB 肉汤 50℃培养)需 4℃冷藏,7 天内使用;斜面培养物(TSA 斜面)需 4℃冷藏,3 周内传代一次,传代需 50℃培养(避免低温影响芽孢形成),使用前需镜检确认芽孢形态,并通过 70℃处理 10 分钟实验验证中低温耐热性。
复苏操作:超净台内,芽孢冻干粉加 1mL 无菌 TSB 肉汤溶解,50℃振荡培养 24-48 小时;待菌液浑浊、镜检见营养体与芽孢,且平板计数萌发率≥96% 时使用;用于中低温灭菌验证时,制备 10^5-10^6 CFU/mL 的菌片或菌液。
传代培养:挑取 TSA 平板(50℃培养)单菌落,划线接种新鲜平板,50℃培养 24-48 小时;斜面保存后 4℃冷藏,传代≤5 代(避免耐热参数漂移),每次传代后需测定 115℃下 D 值验证特性。
应用操作:
中低温灭菌验证:用于医药低温等离子灭菌器械、食品低温杀菌乳制品的工艺验证,判断杀灭率(要求≥99.999%);
特殊消毒测试:评估低温过氧化氢、低温甲醛等消毒剂对耐热菌的杀灭效果,优化特殊场景消毒工艺;
检测校准:校准中低温环境样本(如温泉水、低温灭菌设备)的微生物计数方法;
科研教学:用于芽孢耐热分级研究,及中低温灭菌技术教学演示,对比不同菌株耐热差异。


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