生物安全与来源：生物安全等级为 2 级（BSL-2），具条件致病性，可引发免疫低下人群败血症、心内膜炎，操作需在生物安全柜内进行，器具使用后需 121℃高压灭菌 30 分钟。菌株分离自临床牙周脓肿患者样本，生物学特性与临床分离株高度一致，可模拟自然感染状态下的营养依赖与致病表型。
形态与培养特性：革兰氏阴性球杆菌，具典型营养依赖特征：
显微镜形态：菌体呈球杆状（0.4-0.6μm×0.8-1.5μm），常呈短链或聚集成团排列（“聚集生长” 特性，核心鉴别点），无芽孢、无鞭毛（非运动型），革兰氏染色呈均匀淡红色（易脱色，需严格控制染色时间）；
培养要求：兼性厌氧，需含 5%-10% CO?环境，最适培养基为巧克力琼脂（需添加 X 因子，无需 V 因子，区别于流感嗜血杆菌）、哥伦比亚血琼脂，最适温度 35-37℃，生长缓慢（48-72 小时形成明显菌落），普通营养琼脂因缺乏 X 因子不生长；
菌落形态：巧克力琼脂上呈圆形、表面光滑湿润、边缘整齐的灰白色半透明菌落（直径 0.5-1mm），质地柔软，挑取时易拉丝，无溶血现象，培养过程中因聚集生长，菌落常呈 “葡萄串状” 分布。
生化与耐药特性：生化反应具物种特异性：氧化酶阳性、触酶阴性，发酵葡萄糖、果糖产酸不产气，不发酵乳糖、蔗糖；核心优势在于营养依赖表型稳定：对 X 因子（原卟啉 IX）高度依赖，无 V 因子（烟酰胺腺嘌呤二核苷酸）需求，该特性可快速区分于其他嗜血杆菌；药敏表型经 CLSI 标定，对阿莫西林 / 克拉维酸、头孢曲松敏感（阿莫西林 / 克拉维酸 MIC 0.25-1μg/mL），对青霉素类药物中度敏感，是临床营养依赖型细菌 AST 质控的可靠参照。
未开封状态：以冻干粉（真空包装，含 10^6-10^7 CFU / 支，含 X 因子保护剂）或标准化甘油菌悬液（20% 甘油，10^5 CFU/mL，-80℃专用）供应：
冻干粉：-20℃以下冷冻保存，长期（>6 个月）建议 - 80℃储存，严禁反复冻融（活菌率下降 70% 以上，破坏营养依赖特性），保质期 3 年；
甘油菌：直接 - 80℃保存，不可室温放置（室温暴露 30 分钟致活力下降 50%），保质期 2 年，解冻后一次性使用。
复苏后状态：复苏菌液（巧克力琼脂肉汤培养）需 2-8℃冷藏，5 天内使用完毕；斜面培养物（巧克力琼脂斜面）需 2-8℃冷藏，2 周内传代一次，传代时需含 5% CO?环境且培养基添加足量 X 因子，使用前需镜检确认聚集生长形态，并通过 X 因子依赖实验（接种无 X 因子培养基验证不生长）确认特性。
复苏操作：生物安全柜内，冻干粉加 1mL 无菌巧克力琼脂肉汤（含 X 因子）溶解，转移至试管，37℃ 5% CO?培养箱培养 48-72 小时；待菌液浑浊、镜检见聚集生长的球杆菌，且接种巧克力琼脂形成典型菌落时，即可使用。
传代培养：生物安全柜内，挑取巧克力琼脂单菌落，划线接种新鲜巧克力琼脂平板，37℃ 5% CO?培养 48-72 小时；斜面保存后 2-8℃冷藏，传代≤3 代（避免丢失营养依赖特性），每次传代后需通过 X 因子依赖实验验证菌株质量。
应用操作：
临床质控：验证口腔、呼吸道感染样本鉴定系统（如质谱、生化试剂盒）对营养依赖菌的检出准确性，避免因营养缺乏导致漏检；
AST 测试：校准阿莫西林 / 克拉维酸、头孢曲松等药物 MIC 值，指导临床营养依赖型细菌感染用药；
诊断验证：用于嗜血杆菌属诊断试剂（如 X/V 因子纸片）的性能验证，确保试剂区分不同嗜血杆菌的可靠性；
科研教学：用于细菌营养依赖机制研究（如 X 因子转运基因功能分析），及微生物实验中 “营养型细菌培养与鉴别” 教学演示。
客服1