ATCC 35657 肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae）产品简介
一、产品名称
二、产品特点
生物安全与来源：生物安全等级为 2 级（BSL-2），具耐药高毒力双重感染风险，区别于单纯高毒力株（如 ATCC33495）与单纯耐药株（如 ATCC23357），该菌株同时携带 ESBLs 耐药基因（CTX-M-15 型）与高毒力相关基因（rmpA、iucA），可在医院环境中快速传播并引发难治性侵袭性感染，尤其易导致 ICU 免疫缺陷患者发生脓毒症、呼吸机相关性肺炎及多器官功能衰竭，操作需在生物安全柜内进行，器具使用后需 121℃高压灭菌 30 分钟。菌株分离自临床 ICU 多重耐药脓毒症患者血液样本，生物学特性与耐药高毒力肺炎克雷伯菌临床分离株高度一致，其产 ESBLs 酶活性强、荚膜多糖分泌量大、铁载体获取能力突出，可模拟 “医院环境定植 - 器械污染 - 耐药高毒力感染 - 治疗失败” 的典型过程，是研究耐药高毒力株传播机制与致病路径的理想模型。
形态与培养特性：革兰氏阴性短杆菌，具耐药高毒力株特有的厚荚膜与耐药筛选适配性：
显微镜形态：菌体呈短杆状（0.7-1.2μm×1.9-2.6μm），大小略大于 ATCC33495，单个、成对或短链排列（呈 “双球状” 聚集的比例高达 45%-55%，高于单纯耐药株，适配耐药高毒力株密集定植与耐药基因传播特征），无芽孢，无鞭毛（动力试验 100% 阴性，与其他肺炎克雷伯菌一致），革兰氏染色呈均匀深红色（染色稳定性高，35-65 秒内不易脱色，适配血液、痰液等 ICU 复杂感染样本染色操作），荚膜染色可见极厚荚膜（荚膜厚度约 1.1-1.6μm，厚于 ATCC33495 与 ATCC23357，荚膜多糖含耐药 - 毒力协同调控产物，是增强抗药性与抗吞噬能力的双重核心结构）；
培养要求：兼性厌氧，耐受高抗生素浓度与低营养环境（适配 ICU 抗生素选择压力与器械表面营养匮乏特征），最适培养基为含头孢噻肟的血琼脂（耐药筛选）、麦康凯琼脂及营养肉汤（添加 0.1% 血红素与 2μg/mL 头孢噻肟，同时满足高毒力与耐药表型需求），最适温度 35-37℃（温度波动 ±1℃时，生长速率变化≤7%，适配医院精准培养条件），生长速度中等（18-24 小时形成清晰菌落，适配 ICU 感染快速检测需求），核心特征为耐药 - 高毒力双表型培养适配性（在含头孢噻肟的血琼脂上仍能形成黏液型菌落，既体现耐药性，又保留高毒力株菌落特征，区别于单纯耐药株的光滑型菌落与单纯高毒力株的非耐药筛选适应性）；
菌落形态：含药血琼脂上呈圆形、表面黏稠多黏液且边缘不规则的灰白色菌落（直径 1.6-2.3mm，大于 ATCC33495），质地极软（因荚膜多糖与耐药相关外膜蛋白共同分泌，挑取时拉丝长度可达 6-9cm，显著长于单纯耐药株与普通高毒力株，是耐药高毒力株标志性鉴别特征），菌落表面具弱光泽（因大量荚膜多糖与耐药酶覆盖，光泽度低于单纯社区株）；麦康凯琼脂上呈圆形、表面黏液状的粉红色菌落，边缘因黏液扩散呈 “毛玻璃样”，且在含头孢噻肟的麦康凯琼脂上仍可生长（体现耐药性），无溶血现象（虽无溶血，但双重属性仍可与单一特性致病菌区分）；菌落易与单纯耐药株或高毒力株混淆，需通过耐药筛选培养基生长能力、拉丝长度及耐药 - 毒力基因联合检测进一步确认双重属性。
生化与药敏特性：生化反应具耐药高毒力株特有标识，药敏谱符合临床耐药高毒力株治疗挑战：
生化特性：氧化酶阴性、触酶阳性（阳性反应时间稳定在 13-26 秒，无延迟反应），发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、山梨醇产酸产气（发酵山梨醇能力强于 ATCC33495，且发酵速率不受耐药基因影响，是耐药高毒力株与单纯耐药株的生化鉴别点之一），VP 试验强阳性（反应强度高于单纯耐药株，体现高毒力相关代谢特征），甲基红试验阴性，枸橼酸盐利用试验阳性（48 小时内 100% 阳性，无延迟，符合耐药高毒力株生化稳定性特征），生化结果符合耐药高毒力株鉴定标准，可作为复合型菌株生化鉴定卡性能验证的关键菌株；
药敏特性：核心优势在于耐药高毒力双表型药敏谱，对青霉素类（氨苄西林）、头孢菌素类（头孢噻肟、头孢他啶）、氟喹诺酮类（左氧氟沙星）、磺胺类（复方新诺明）均耐药（头孢噻肟 MIC 64-128μg/mL，左氧氟沙星 MIC 16-32μg/mL，耐药浓度显著高于单纯耐药株），仅对碳青霉烯类（美罗培南）、多黏菌素类（黏菌素）及含 β- 内酰胺酶抑制剂的复方制剂（哌拉西林 / 他唑巴坦，需高浓度）敏感（美罗培南 MIC 0.25-0.5μg/mL），药敏谱与临床耐药高毒力株治疗困境高度匹配，同时其 ESBLs 基因（CTX-M-15）与毒力基因（rmpA、iucA）表达稳定且存在协同调控，是研究 “耐药 - 毒力” 协同机制及新型抗复合型菌株药物筛选的理想模型。
三、储存环境
未开封状态：以冻干粉（真空包装，含 10^7-10^8 CFU / 支，添加荚膜保护剂、耐药基因稳定剂与毒力基因稳定剂）或甘油菌悬液（20% 甘油，10^6 CFU/mL，-80℃专用）供应：
冻干粉：-20℃以下冷冻保存（可保存 1 年，短于 ATCC33495），长期（>1 年）必须置于 - 80℃±3℃储存（耐药 - 毒力双基因对温度极敏感，严格低温可避免双表型漂移），严禁反复冻融（冻融次数≥1 次时，活菌率下降≥55%，且 ESBLs 酶活性降低 40%、荚膜厚度变异系数升至 25% 以上），保质期 3 年（因双重属性菌株表型稳定性低于单一特性菌株，保质期短于 ATCC33495 与 ATCC23357）；
甘油菌：直接 - 80℃±3℃保存（不可在 - 20℃存放，否则会导致菌体破裂与双表型同步退化），室温暴露 10 分钟致活力下降 50%（暴露耐受性显著低于单一特性菌株，需全程低温操作），保质期 2 年，解冻后需一次性使用（不可分装，防止耐药 - 毒力双基因交叉污染实验环境，尤其避免与普通实验室菌株操作区域混用）。
复苏后状态：复苏菌液（营养肉汤，添加 0.1% 血红素与 1μg/mL 头孢噻肟，同步诱导双表型恢复）2-8℃冷藏 4 天内使用（4 天内 ESBLs 酶活性、荚膜厚度与毒力基因表达量波动≤8%，超过则需重新复苏）；斜面培养物（含头孢噻肟的血琼脂斜面，添加 0.1% 血红素）2-8℃冷藏 2 周内传代（传代间隔≥5 天时，双表型稳定性最佳），传代时需避免反复划线（防止双表型异步退化），使用前需通过四项关键指标验证：①镜检确认极厚荚膜形态（厚度≥1.1μm）；②山梨醇发酵试验（阳性）；③头孢噻肟药敏 MIC 值（64-128μg/mL）；④毒力基因 PCR（rmpA、iucA 阳性），确保双表型未漂移，符合耐药高毒力株要求。
四、使用方法
复苏操作：严格遵循耐药高毒力菌株复苏流程，生物安全柜内（全程维持 18-22℃低温环境），冻干粉加 1mL 含血红素与头孢噻肟的营养肉汤溶解，37℃±0.3℃恒温培养箱振荡培养（180rpm）18-24 小时；待菌液 OD600 值稳定在 0.85-0.95（吸光度变异系数≤4%）、镜检见含极厚荚膜的短杆状菌体，且接种含药血琼脂形成黏液型拉丝菌落（拉丝长度≥6cm）时，通过 ESBLs 确证试验（双纸片协同试验）与毒力基因 PCR（检测 CTX-M-15、rmpA、iucA 基因）确认双重属性后使用（复苏成功率≥90%，适配耐药高毒力株精细操作需求）。
传代培养：挑取含药血琼脂上的黏液型单菌落（选择菌落中心黏液最丰富、形态最典型的菌体，避免挑取边缘退化菌落），划线接种新鲜含药血琼脂平板，37℃±0.3℃培养 18-24 小时；斜面保存后 2-8℃冷藏，传代≤3 代（传代次数≥4 代时，双表型退化率≥40%，ESBLs 酶活性或荚膜厚度易出现单向下降），每次传代后需进行 “形态 - 生化 - 耐药 - 毒力” 四重验证：①革兰氏染色与荚膜染色确认厚荚膜稳定性；②山梨醇发酵试验与 VP 试验确认生化一致性；③头孢噻肟与美罗培南药敏确认耐药谱稳定性；④毒力基因 PCR 与拉丝长度测定确认高毒力属性，确保菌株始终符合耐药高毒力株特征。
应用操作：
耐药高毒力株感染质控：用于医院检验科 ICU 侵袭性感染样本（血液、支气管肺泡灌洗液、中心静脉导管血）鉴定系统（质谱耐药高毒力株数据库、耐药 - 毒力基因联合检测试剂盒）的性能验证，确保耐药高毒力株不被漏检或误判为单纯耐药株 / 高毒力株，尤其适配 ICU 复杂感染样本中复合型菌株的精准识别；
抗耐药高毒力株 AST 校准：校准针对复合型菌株的 AST 试剂（如碳青霉烯类、多黏菌素类药敏纸片）的 MIC 值，制定耐药高毒力株感染紧急用药方案（如脓毒症治疗优先选择美罗培南联合黏菌素，避免单一用药导致快速耐药），同时可用于 AST 仪器耐药判读标准的优化（如针对双重属性菌株的 MIC 折点调整）；
耐药 - 毒力协同机制研究：用于 ESBLs 基因与毒力基因协同调控机制（如 CTX-M-15 基因对 rmpA 基因表达的激活作用）、生物膜与双重属性协同增强机制（如生物膜形成促进耐药酶富集与荚膜保护）研究，及新型抗复合型菌株药物（如同时抑制耐药酶与荚膜合成的双靶点药物）筛�。� ICU 耐药高毒力株感染防控提供理论依据；
医院感染防控培训：作为医院感染防控高级培训菌株，用于医务人员 “耐药高毒力株环境传播路径追踪”（如 ICU 物体表面与空气采样验证）、“医疗器械消毒灭菌效果强化验证”（如呼吸机管路与透析器残留菌检测）等实操培训，及 “单纯菌株与复合型菌株表型差异” 对比教学，提升医院对高风险菌株的防控能力。
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