ATCC 23330 金氏菌（Kingella kingae）产品简介
一、产品名称
二、产品特点
生物安全与来源：生物安全等级为 2 级（BSL-2），具儿童感染倾向性，主要定植于儿童口咽部（5 岁以下儿童定植率约 10%-15%），成人定植率极低，可通过呼吸道飞沫或密切接触传播，在儿童免疫力下降或黏膜屏障受损时引发感染，尤其易导致 3 个月 - 3 岁婴幼儿发生化脓性关节炎与骨髓炎，病死率较低但易引发关节功能障碍等后遗症，操作需在生物安全柜内进行，器具使用后需 121℃高压灭菌 30 分钟。菌株分离自儿童菌血症患者血液样本，生物学特性代表金氏菌属的典型表型，其黏附上皮细胞能力、产内毒素特性均符合临床流行株特征，可模拟 “口咽部定植 - 侵入血液 - 靶向关节 / 骨骼” 的儿童感染过程，是研究儿童金氏菌感染机制的理想模型。
形态与培养特性：革兰氏阴性球菌（呈双球菌或短链状排列，易被误判为链球菌），具儿童感染菌特有的培养适配性与形态鉴别特征：
显微镜形态：菌体呈圆形或卵圆形（直径 0.6-1.0μm），大小均一性高（变异系数≤6%），典型排列方式为双球菌状（类似淋病奈瑟菌，区别于链球菌的长链状排列），部分呈短链状（2-4 个菌体相连），无芽孢，无鞭毛（动力试验 100% 阴性，区别于动力阳性的相关菌属），革兰氏染色呈均匀浅红色（染色稳定性中等，需控制染色时间在 20-30 秒，过长易脱色，适配儿童感染样本中混杂黏液的染色操作），无荚膜（荚膜染色阴性，区别于有荚膜的肺炎链球菌）；核心鉴别特征为菌体两端浓染（革兰氏染色时两端颜色深于中间，呈 “双极染色” 现象，是金氏菌属的标志性形态特征）；
培养要求：兼性厌氧，需 5%-10% CO?环境促进生长（普通空气环境中生长缓慢，菌落形成时间延长至 48 小时以上），最适培养基为哥伦比亚血琼脂、巧克力琼脂，营养要求较高（需添加维生素 B??与血红素，普通营养琼脂上不生长，区别于营养要求低的肠杆菌科细菌），最适温度 35-37℃（温度低于 30℃时生长停滞，适配人体体温相关感染菌特征），生长速度较慢（24-36 小时形成清晰菌落，适配儿童感染潜伏期较长的特点），核心特征为溶血特性（在哥伦比亚血琼脂上形成 β- 溶血环，溶血环狭窄且清晰，区别于肺炎链球菌的 α- 溶血与链球菌的宽 β- 溶血环，是肉眼快速鉴别关键特征）；
菌落形态：血琼脂上呈圆形、表面光滑湿润、边缘整齐的灰白色菌落（直径 0.5-1.0mm，小于多数革兰氏阴性杆菌菌落），质地柔软，挑取时易破碎（区别于肺炎克雷伯菌的拉丝特性），菌落表面具弱光泽（因菌体代谢产物覆盖，光泽度低于奈瑟菌属）；巧克力琼脂上菌落颜色略深，呈浅灰色，溶血特性不明显（需通过血琼脂确认溶血类型）；在儿童咽拭子样本培养中，需优先选择血琼脂并置于 CO?培养箱，避免因培养条件不当导致漏检；菌落易与奈瑟菌属、链球菌属混淆，需通过双极染色、溶血特性及生化反应进一步确认属性。
生化与药敏特性：生化反应具金氏菌属典型特征，药敏谱符合儿童感染治疗需求：
生化特性：氧化酶阳性（阳性反应快速，5-10 秒内出现紫色，区别于氧化酶阴性的链球菌），触酶阴性（核心鉴别点之一，区别于触酶阳性的奈瑟菌属与葡萄球菌属），不发酵糖类（对葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖均不发酵，区别于多数发酵糖类的肠杆菌科细菌与部分奈瑟菌），硝酸盐还原试验阳性（还原硝酸盐为亚硝酸盐，反应稳定），尿素酶试验阴性，明胶液化试验阴性；生化反应结果完全符合《伯杰细菌鉴定手册》中金氏菌属的描述，可作为金氏菌属生化鉴定卡性能验证的 “金标准菌株”，尤其适合儿科实验室区分易混淆的革兰氏阴性球菌；
药敏特性：核心优势在于儿童感染适配药敏谱，无多重耐药基因携带（区别于医院获得性耐药菌），对儿科常用抗菌药物（青霉素 G、阿莫西林、头孢曲松、阿奇霉素）均敏感，MIC 值高度标准化（青霉素 G MIC 0.12-0.5μg/mL，头孢曲松 MIC 0.06-0.25μg/mL），仅对多黏菌素类（黏菌素）、磺胺类（复方新诺明）天然耐药（黏菌素 MIC≥32μg/mL，符合金氏菌属天然耐药特性）；药敏谱与儿童金氏菌感染治疗响应高度匹配，同时其黏附儿童关节滑膜细胞的能力稳定，是研究儿童化脓性关节炎发病机制及新型儿科抗菌药物筛选的理想模型。
三、储存环境
未开封状态：以冻干粉（真空包装，含 10^6-10^7 CFU / 支，添加维生素 B??稳定剂与菌体保护剂）或甘油菌悬液（20% 甘油，10^5 CFU/mL，-80℃专用）供应：
冻干粉：-20℃以下冷冻保存（可保存 2 年，因营养要求高，保质期短于肠杆菌科细菌），长期（>2 年）必须置于 - 80℃±5℃储存（低温可维持维生素 B??依赖特性，避免生化表型漂移），严禁反复冻融（冻融次数≥2 次时，活菌率下降≥60%，且双极染色特性易丢失），保质期 4 年（是金氏菌属中保质期较长的菌株，适配儿科实验室长期储备需求）；
甘油菌：直接 - 80℃±5℃保存（不可在 - 20℃存放，否则会导致菌体破裂与营养依赖特性退化），室温暴露 15 分钟致活力下降 45%（暴露耐受性低于肠杆菌科细菌，需严格控制操作时间），保质期 2 年，解冻后需一次性使用（不可分装，防止因分装导致的菌株污染或营养成分流失）。
复苏后状态：复苏菌液（巧克力肉汤，添加 0.01% 维生素 B??）2-8℃冷藏 5 天内使用（5 天内生化反应与药敏 MIC 值波动≤1 个稀释度，超过则需重新复苏）；斜面培养物（巧克力琼脂斜面，添加 0.01% 维生素 B??）2-8℃冷藏 3 周内传代（传代间隔≥7 天时，表型稳定性最佳），传代时需避免反复划线（防止菌株纯度下降导致的溶血特性减弱），使用前需通过四项关键指标验证：①镜检确认双球菌形态与双极染色（变异系数≤8%）；②氧化酶阳性与触酶阴性；③硝酸盐还原试验阳性；④青霉素 G 药敏 MIC 值（0.12-0.5μg/mL），确保表型未漂移，符合金氏菌模式菌株要求。
四、使用方法
复苏操作：严格遵循金氏菌复苏流程，生物安全柜内，冻干粉加 1mL 含维生素 B??的巧克力肉汤溶解，37℃±0.5℃ CO?培养箱（CO?浓度 5%）静态培养 24-36 小时；待菌液 OD600 值稳定在 0.6-0.7（吸光度变异系数≤4%）、镜检见双球菌状菌体且具双极染色，接种血琼脂形成带狭窄 β- 溶血环的灰白色菌落时，通过触酶试验与硝酸盐还原试验确认特性后使用（复苏成功率≥90%，需严格控制 CO?浓度与营养成分，适配儿科实验室操作需求）。
传代培养：挑取血琼脂上的典型单菌落（选择溶血环清晰、形态标准的菌落，避免挑取边缘变异菌落），划线接种新鲜血琼脂平板，37℃±0.5℃ CO?培养箱培养 24-36 小时；斜面保存时，挑取单菌落接种巧克力琼脂斜面，培养 36 小时后置于 2-8℃冷藏；传代≤4 代（传代次数≥5 代时，双极染色特性退化率≥30%，溶血环变模糊），每次传代后需进行 “形态 - 生化 - 药敏” 三重验证：①革兰氏染色确认双球菌形态与双极染色稳定性；②氧化酶、触酶及硝酸盐还原试验确认生化一致性；③青霉素 G 与头孢曲松药敏确认耐药谱稳定性，确保菌株始终符合金氏菌模式菌株属性。
应用操作：
儿科感染质控：用于儿童医院检验科、儿科诊所的儿童感染样本（关节液、骨髓液、咽拭子、血液）鉴定系统（质谱金氏菌专属数据库、儿科快速生化卡）的性能验证，确保儿童金氏菌感染不被漏检或误判为奈瑟菌、链球菌，尤其适配婴幼儿样本中低菌量感染的精准检测；
儿科 AST 校准：校准儿科常用 AST 试剂（如青霉素 G、头孢曲松药敏纸片）的 MIC 值，制定儿童金氏菌感染用药方案（如化脓性关节炎治疗优先选择静脉用头孢曲松，避免使用复方新诺明等天然耐药药物），同时可用于儿科 AST 仪器判读标准的优化（如儿童低体重患者的药物剂量换算参考）；
儿童感染机制研究：用于金氏菌黏附儿童口咽部上皮细胞、关节滑膜细胞机制研究（如黏附蛋白基因king的功能分析）、儿童免疫系统与金氏菌相互作用研究（如儿童抗体水平对感染的影响），为儿童金氏菌感染预防（如口咽部定植干预）与治疗提供理论依据；
儿科诊断试剂研发：作为儿科金氏菌诊断试剂（如胶体金抗原试纸、荧光定量 PCR 试剂盒）的标准品，校准试剂对儿童样本的检测敏感性与特异性，解决儿童样本中菌量少、干扰成分多导致的检测难题，同时可用于不同品牌儿科诊断试剂的性能对比研究。
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