形态与生化:菌体呈短杆状或球杆状,大小(0.5-1.0)μm×(1.0-2.0)μm,两端钝圆,无芽孢,无鞭毛(无运动性,与有鞭毛的大肠埃希氏菌形成明显鉴别),多数菌株具有较厚的荚膜(经荚膜染色后呈明显黏液状,菌落形态易区分)。最适生长温度 35-37℃,兼性厌氧(有氧环境生长更旺盛,菌落形成速度快;无氧时可通过发酵葡萄糖产酸供能),适宜 pH 7.0-7.6;生化特征具属种特异性:发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖均产酸产气,氧化酶阴性,触酶阳性,硝酸盐还原试验阳性,吲哚试验阳性(与肺炎克雷伯菌 “吲哚试验阴性” 的核心差异点,是两者鉴别的关键标志),VP 试验阳性,可利用柠檬酸盐作为唯一碳源,不产生硫化氢,这些稳定的生化反应是产酸克雷伯菌精准鉴别的核心依据。
致病性相关:属于条件致病菌,广泛存在于土壤、水、植物及人类肠道、呼吸道黏膜,是人体正常菌群的组成部分;当机体免疫功能低下(如老年人、糖尿病患者、长期使用抗生素人群)时,可引发多种感染,常见于尿路感染(如膀胱炎、肾盂肾炎)、呼吸道感染(如肺炎、支气管炎),偶可导致败血症、腹腔感染等全身性感染,部分菌株可产生细胞毒素引发抗生素相关性肠炎。ATCC 43086 毒力特性明确,无显著耐药基因,主要用于与临床耐药产酸克雷伯菌(如产 ESBLs 菌株)的对比研究,及感染检测的阳性对照株。
培养:无需特殊气体环境,常规有氧培养即可。推荐培养基包括:营养琼脂(NA,用于菌株活化与纯培养,菌落呈乳白色、黏液状,表面光滑湿润,直径 2.0-3.0mm,因荚膜存在易融合,挑取时呈拉丝状,具典型克雷伯菌菌落特征)、麦康凯琼脂(MAC,因发酵乳糖,菌落呈粉红色黏液状,直径 1.5-2.5mm,边缘整齐,与非发酵乳糖的肠道致病菌区分明显)、伊红美蓝琼脂(EMB,菌落呈紫黑色,中心具微弱金属光泽或无光泽,黏液状质地突出,便于快速识别)、TSB 肉汤(用于增菌培养,37℃振荡培养 18-24 小时后,菌液呈中度至重度浑浊,因荚膜成分导致菌液黏稠度略高)。37℃培养 16-24 小时后,各类培养基上均形成典型黏液状菌落,满足鉴别与纯化需求。
保存:短期保存(1-4 周):将活化后的纯菌株接种至营养琼脂斜面,37℃培养 12-16 小时后,密封斜面管口(防止培养基水分流失与杂菌污染,避免黏液状菌落脱水萎缩),置于 4℃冰箱冷藏,期间每 2 周观察 1 次,若出现菌落变色、污染或斜面长霉,需立即重新活化;长期保存(1 年以上):采用 - 80℃甘油冷冻保存(20% 无菌甘油与对数期菌液按 1:1 体积混合,菌液需取自新鲜 TSB 肉汤,分装至无菌冻存管,避免反复冻融破坏荚膜结构与菌株特性),或冻干保存(以 10% 脱脂乳为保护剂,冻干过程维持低温干燥,冻干后置于 - 20℃以下环境)。复苏时,将冻存菌液或冻干菌粉接入 TSB 肉汤,37℃振荡培养 8-10 小时(转速 180-200rpm),待菌液浑浊后转接营养琼脂或麦康凯琼脂纯化,复苏后需通过生化反应(如吲哚试验阳性、乳糖发酵产气)验证,确保菌株特性未改变。
应用:在临床检测领域,作为产酸克雷伯菌感染诊断的质控株,用于验证麦康凯琼脂、EMB 等选择性培养基的性能(促生长能力与选择性),校准 AST 实验(纸片扩散法、肉汤稀释法)中头孢类、喹诺酮类等抗菌药物的抑菌圈直径或最低抑菌浓度(MIC),帮助实验室区分产酸克雷伯菌与肺炎克雷伯菌,确保感染诊断准确性;在科研领域,用于产酸克雷伯菌致病机制研究(如荚膜的黏附作用、毒素合成机制),及新型抗菌药物(针对克雷伯菌属)的体外活性评价,同时可用于肠道菌群互作机制分析(如与益生菌的拮抗作用);在工业领域,作为微生物检测试剂(如生化鉴定试剂盒、快速核酸检测试纸条)生产企业的出厂质控株,验证试剂性能稳定性;在教学领域,用于微生物学实验,演示 “革兰氏阴性杆菌形态观察”“荚膜染色技术”“生化反应鉴别(如吲哚试验、VP 试验)”,帮助学习者掌握肠杆菌科克雷伯菌属的核心特性。
安全:需在生物安全二级(BSL-2)实验室操作(因可引发全身感染,且临床株易产生耐药性);涉及菌液移液、离心、平板涂布等可能产生气溶胶的操作时,需在生物安全柜内进行,操作人员需佩戴无菌手套、口罩、护目镜,避免皮肤接触菌液或吸入含菌气溶胶(黏液状菌液易形成飞沫,需加强防护);实验后,所有污染耗材(培养皿、吸头、离心管、接种环)需经 121℃高压灭菌 30 分钟以上(确保彻底杀灭菌株),实验台面用含氯消毒剂(有效氯 1000mg/L)擦拭消毒,再用 75% 乙醇二次消毒;菌株储存需单独存放于专用 BSL-2 实验室冰箱,冻存管清晰标注 “ATCC 43086 产酸克雷伯菌 - 非耐药株”、保存日期及操作人员,严禁与耐药克雷伯菌(如产 KPC 酶菌株)或其他致病性肠杆菌混合存放,防止交叉污染与耐药基因扩散。


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