ATCC 10031 肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)产品简介
一、产品名称
二、产品特点
生物安全与来源:生物安全等级为 2 级(BSL-2),具广谱致病性,广泛存在于自然环境(土壤、水体)及人体肠道、呼吸道,免疫力低下人群(老年人、慢性肺病患者、住院患者)易发生感染,可引发社区与医院双重场景感染,操作需在生物安全柜内进行,器具使用后需 121℃高压灭菌 30 分钟。菌株分离自临床肺炎患者痰液样本,生物学特性代表肺炎克雷伯菌的典型表型,其荚膜结构、生化反应及药敏特征均符合该属模式菌株标准,可作为肺炎克雷伯菌属鉴定的 “金标准模板”,适配各类基础实验与临床质控需求。
形态与培养特性:革兰氏阴性短杆菌,具厚荚膜与产酸特性双重典型鉴别特征:
显微镜形态:菌体呈短杆状(0.5-1.0μm×1.5-2.5μm),较产酸克雷伯菌更粗短,单个或成对排列(常呈 “双球状” 聚集,区别于分散生长的其他肠杆菌科菌株),无芽孢,无鞭毛(动力试验阴性,核心鉴别点之一,区别于有鞭毛的产酸克雷伯菌),革兰氏染色呈均匀深红色(染色稳定性高,30-60 秒内不易脱色,适配复杂临床样本染色操作),荚膜染色可见明显厚荚膜(荚膜厚度约 0.5-1.0μm,厚于产酸克雷伯菌,是肺炎克雷伯菌抗吞噬、增强致病性的关键结构);
培养要求:兼性厌氧,无需特殊 CO?环境(适配临床常规培养条件),最适培养基为麦康凯琼脂、伊红美蓝琼脂(EMB)及营养琼脂,最适温度 35-37℃,生长速度快(18-24 小时形成清晰菌落,适配临床快速检测需求),在普通营养琼脂上可正常生长,核心特征为产酸产气能力(在麦康凯琼脂上形成粉红色菌落,因发酵乳糖产酸使指示剂变色,产酸强度弱于产酸克雷伯菌,菌落颜色更浅,易与非发酵菌区分);
菌落形态:麦康凯琼脂上呈圆形、表面光滑黏稠、边缘整齐的粉红色菌落(直径 1.2-2.0mm),质地柔软且具弹性,挑取时拉丝长度可达 2-4cm(因厚荚膜多糖分泌,拉丝现象比产酸克雷伯菌更明显,是肉眼鉴别重要特征),菌落表面具强光泽;在 EMB 琼脂上呈紫黑色、中心带金属光泽的菌落(光泽度强于产酸克雷伯菌),无溶血现象(接种绵羊血琼脂无溶血环,区别于医院常见的溶血性链球菌);菌落易与产酸克雷伯菌混淆,需通过动力试验、荚膜厚度及生化反应进一步区分。
生化与药敏特性:生化反应具属级典型性与物种特异性:氧化酶阴性、触酶阳性,发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖产酸产气(不发酵麦芽糖,区别于发酵麦芽糖的产酸克雷伯菌,核心生化鉴别点),不发酵肌醇与山梨醇,VP 试验强阳性,甲基红试验阴性,枸橼酸盐利用试验阳性(生化结果稳定无变异,适配生化鉴定教学与诊断试剂验证);核心优势在于标准药敏表型:对临床常用抗菌药物(头孢曲松、左氧氟沙星、庆大霉素、阿莫西林 / 克拉维酸)均敏感,仅对氨苄西林天然耐药(MIC≥32μg/mL,符合肺炎克雷伯菌天然耐药谱),MIC 值高度标准化(头孢曲松 MIC 0.12-0.5μg/mL),无耐药基因携带(区别于临床耐药株),是 AST 方法建立、药敏试剂校准及抗菌药物敏感性判定标准制定的基准菌株,同时其厚荚膜介导的致病能力稳定,是研究肺炎克雷伯菌侵袭机制的理想模型。
三、储存环境
未开封状态:以冻干粉(真空包装,含 10^7-10^8 CFU / 支,含荚膜保护剂与表型稳定剂)或甘油菌悬液(20% 甘油,10^6 CFU/mL,-80℃专用)供应:
冻干粉:-20℃以下冷冻保存,长期(>1 年)建议 - 80℃储存(低温可更好维持厚荚膜结构与生化稳定性),严禁反复冻融(活菌率下降 50% 以上,易导致荚膜退化与药敏表型漂移),保质期 5 年(因作为模式菌株表型稳定性高,保质期长于临床耐药株);
甘油菌:直接 - 80℃保存,-20℃短期存放(≤1 个月)仍可维持活性(区别于对温度敏感的耐药株),室温暴露 30 分钟致活力下降 30%,保质期 3 年,解冻后可分装少量用于短期实验(适配多次基础实验与教学需求)。
复苏后状态:复苏菌液(营养肉汤培养)2-8℃冷藏 7 天内使用(模式菌株代谢稳定,保存时间适配常规实验周期);斜面培养物(营养琼脂斜面)2-8℃冷藏 4 周内传代,传代无需特殊环境与添加剂,使用前需镜检确认粗短杆状形态,并通过麦芽糖发酵试验(阴性)与氨苄西林药敏预实验(耐药)验证特性(确保表型未漂移)。
四、使用方法
复苏操作:生物安全柜内,冻干粉加 1mL 营养肉汤溶解,37℃恒温培养箱培养 18-24 小时;待菌液浑浊(OD600≈0.8)、镜检见粗短杆状菌体,且接种麦康凯琼脂形成粉红色拉丝菌落时使用(复苏成功率≥98%,操作简便,适配新手与基层实验室操作)。
传代培养:挑取麦康凯琼脂上的粉红色单菌落,划线接种新鲜麦康凯琼脂平板(或营养琼脂平板),37℃培养 18-24 小时;斜面保存后 2-8℃冷藏,传代≤6 代(模式菌株表型稳定,传代次数适配常规实验需求),每次传代后需通过触酶试验、VP 试验及动力试验三重验证典型特性(确保无杂菌污染与表型退化)。
应用操作:
基础研究与教学:用于微生物基础实验教学(革兰氏染色、菌落形态观察、生化鉴定、AST 操作),作为学生掌握肠杆菌科菌株鉴别要点的 “标准教具”,同时可用于肺炎克雷伯菌荚膜合成机制、毒力基因功能等基础研究,作为实验对照组菌株;
临床检测标准化:用于医院检验科与诊断试剂企业建立肺炎克雷伯菌鉴定方法(如质谱数据库构建、生化鉴定卡性能验证),校准 AST 仪器(自动药敏分析仪)与试剂(药敏纸片、药敏板)的检测性能,确保临床检测结果的一致性与准确性;
感染机制研究:用于肺炎克雷伯菌黏附呼吸道上皮细胞(如 A549 细胞)、穿透血脑屏障等侵袭机制研究,分析厚荚膜、菌毛等毒力因子在感染中的作用,为新型抗感染药物(如荚膜多糖疫苗)研发提供模型;
质量控制:作为临床微生物实验室日常质控菌株,用于监控培养基质量(如麦康凯琼脂的选择性与指示剂有效性)、培养环境稳定性及操作人员技术水平,保障临床样本检测结果的可靠性。


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