ATCC 23357 肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae）产品简介
一、产品名称
二、产品特点
生物安全与来源：生物安全等级为 2 级（BSL-2），具医院耐药感染倾向性，主要定植于医院重症监护室（ICU）环境（如呼吸机管路、中心静脉导管表面）及长期住院患者肠道，尤其易感染机械通气、免疫抑制或长期使用广谱抗生素的高危人群，可引发难治性感染并导致治疗失败，操作需在生物安全柜内进行，器具使用后需 121℃高压灭菌 30 分钟。菌株分离自临床呼吸机相关性肺炎患者支气管肺泡灌洗液样本，生物学特性与医院获得性 ESBLs 阳性肺炎克雷伯菌分离株高度一致，其产酶能力、生物膜形成强度及耐药谱均符合临床流行株特征，可模拟医院环境中 “器械污染 - 患者定植 - 耐药感染” 的典型过程，是研究医院耐药肺炎克雷伯菌感染机制的理想模型。
形态与培养特性：革兰氏阴性短杆菌，具耐药菌株特有的形态稳定性与培养适配性：
显微镜形态：菌体呈短杆状（0.5-1.0μm×1.5-2.4μm），大小均一性优于普通临床耐药株（变异系数≤7%，适配耐药菌株形态质控），单个、成对或短链排列（呈 “双球状” 聚集的比例稳定在 25%-35%，可作为耐药株形态识别指标），无芽孢，无鞭毛（动力试验 100% 阴性，与国际标准株一致，区别于动力阳性的肠杆菌属菌株），革兰氏染色呈均匀深红色（染色稳定性高，30-60 秒内不易脱色，适配 ICU 复杂样本（如含黏液、杂质的灌洗液）染色操作），荚膜染色可见厚荚膜（荚膜厚度约 0.4-0.9μm，略薄于 ATCC13883，但荚膜多糖成分含耐药相关修饰，是增强抗药性的关键结构）；
培养要求：兼性厌氧，耐受高二氧化碳与低氧环境（适配 ICU 密闭通气环境，在 8%-12% CO?环境中生长速率提升 15%，符合医院感染微环境特征），最适培养基为麦康凯琼脂（含第三代头孢菌素筛�。缤锋哙珉� 5μg/mL）、中国蓝琼脂及营养琼脂，最适温度 35-37℃（温度波动 ±1℃时，生长速率变化≤8%，适配医院实验室培养条件差异），生长速度较快（16-22 小时形成清晰菌落，适配 ICU 感染快速检测需求），核心特征为耐药筛选适应性（在含头孢噻肟的选择性培养基上 100% 生长，普通敏感株（如 ATCC13883）则完全抑制，可快速区分耐药株与敏感株）；
菌落形态：麦康凯琼脂上呈圆形、表面光滑黏稠且边缘略不规则的粉红色菌落（直径 1.2-1.8mm），质地坚韧（因生物膜基质分泌量高，较 ATCC13883 更难挑�。羧∈崩砍ざ任榷ㄔ� 1.8-3.5cm（拉丝长度短于 ATCC13883，是耐药株与敏感株的肉眼鉴别点之一），菌落表面具弱光泽（因耐药相关外膜蛋白表达，光泽度低于 ATCC13883）；在中国蓝琼脂上呈蓝色、中心深染的菌落，无溶血现象（接种绵羊血琼脂无溶血环，区别于医院常见的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌）；菌落易与普通敏感株混淆，需通过选择性培养基生长能力、拉丝长度及药敏试验进一步确认耐药属性。
生化与药敏特性：生化反应具物种特异性且含耐药菌株标识，药敏谱符合医院获得性 ESBLs 阳性株特征：
生化特性：氧化酶阴性、触酶阳性（阳性反应时间稳定在 12-25 秒，无延迟反应），发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖产酸产气（发酵速率慢于 ATCC13883，产气量差异≤10%），不发酵麦芽糖、肌醇（与 ATCC13883 一致），但对山梨醇呈弱阳性发酵（48 小时内菌落周围出现浅红色晕圈，普通敏感株则完全不发酵，是耐药株生化鉴别点），VP 试验强阳性，甲基红试验阴性，枸橼酸盐利用试验阳性（48 小时内 100% 阳性，无假阴性），生化结果符合医院感染耐药肺炎克雷伯菌特征，可作为生化鉴定卡耐药株识别性能验证的关键菌株；
药敏特性：核心优势在于临床耐药谱标准化，携带 ESBLs 基因（TEM-1 与 SHV-12 型，符合医院获得性肺炎克雷伯菌主要 ESBLs 基因型），对青霉素类（氨苄西林、阿莫西林）天然耐药（MIC≥64μg/mL），对第三代头孢菌素（头孢噻肟、头孢他啶）耐药（头孢噻肟 MIC 32-64μg/mL，头孢他啶 MIC 16-32μg/mL），对氟喹诺酮类（左氧氟沙星）中度耐药（MIC 8-16μg/mL），仅对碳青霉烯类（美罗培南）、含 β- 内酰胺酶抑制剂的复方制剂（哌拉西林 / 他唑巴坦）及氨基糖苷类（阿米卡星）敏感（美罗培南 MIC 0.12-0.25μg/mL），药敏谱与国内医院 ESBLs 阳性肺炎克雷伯菌流行株高度一致，是抗 ESBLs AST 方法建立、药敏试剂校准及医院感染用药方案制定的基准菌株，同时其生物膜相关耐药基因（如 ompK36、acrAB）表达稳定，是研究耐药株生物膜耐药机制的理想模型。
三、储存环境
未开封状态：以冻干粉（真空包装，含 10^7-10^8 CFU / 支，添加 ESBLs 基因稳定剂与荚膜保护剂）或甘油菌悬液（20% 甘油，10^6 CFU/mL，-80℃专用）供应：
冻干粉：-20℃以下冷冻保存（可保存 1.5 年，短于 ATCC13883），长期（>1.5 年）必须置于 - 80℃±5℃储存（ESBLs 基因对温度敏感，低温可避免基因突变导致的产酶能力下降），严禁反复冻融（冻融次数≥2 次时，活菌率下降≥55%，且 ESBLs 产酶活性降低 30% 以上），保质期 4 年（因耐药菌株表型稳定性略低于敏感株，保质期短于 ATCC13883）；
甘油菌：直接 - 80℃±5℃保存（不可在 - 20℃存放，否则会导致菌体破裂与 ESBLs 基因丢失），室温暴露 15 分钟致活力下降 40%（暴露时间≤8 分钟时，活力下降≤12%，需严格控制室温操作时间），保质期 2 年，解冻后需一次性使用（不可分装，防止耐药基因交叉污染实验环境，尤其避免与敏感株实验区域混用）。
复苏后状态：复苏菌液（营养肉汤，添加头孢噻肟 1μg/mL 诱导 ESBLs 基因表达）2-8℃冷藏 5 天内使用（5 天内 ESBLs 产酶活性波动≤10%，超过则需重新复苏）；斜面培养物（营养琼脂斜面，含头孢噻肟 2μg/mL）2-8℃冷藏 3 周内传代（传代间隔≥6 天时，ESBLs 表型稳定性最佳），传代时需避免反复划线（防止菌株纯度下降导致的药敏结果偏差），使用前需通过三项关键指标验证：①镜检确认菌体大小均一性（变异系数≤10%）；②山梨醇发酵试验（弱阳性）；③头孢噻肟药敏 MIC 值（32-64μg/mL），确保表型未漂移，符合耐药株要求。
四、使用方法
复苏操作：严格遵循耐药菌株复苏流程，生物安全柜内，冻干粉加 1mL 含头孢噻肟的营养肉汤溶解，37℃±0.5℃恒温培养箱振荡培养（120rpm）16-22 小时；待菌液 OD600 值稳定在 0.7-0.8（吸光度变异系数≤5%）、镜检见大小均一的粗短杆状菌体，且接种含头孢噻肟的麦康凯琼脂形成粉红色菌落时，通过 ESBLs 确证试验（双纸片协同试验：头孢噻肟纸片与克拉维酸纸片协同抑菌圈直径差≥5mm）确认耐药特性后使用（复苏成功率≥95%，适配医院实验室耐药株操作需求）。
传代培养：挑取含药麦康凯琼脂上的粉红色单菌落（选择菌落中心、形态最典型的菌体，避免挑取边缘退化菌落），划线接种新鲜含药麦康凯琼脂平板，37℃±0.5℃培养 16-22 小时；斜面保存后 2-8℃冷藏，传代≤4 代（传代次数≥5 代时，ESBLs 产酶活性降至初始水平的 70% 以下，不符合耐药株要求），每次传代后需进行 “形态 - 生化 - 药敏” 三重验证：①革兰氏染色确认染色稳定性；②山梨醇发酵试验与 VP 试验确认生化一致性；③头孢噻肟与美罗培南药敏确认耐药谱稳定性，确保菌株始终符合医院获得性耐药肺炎克雷伯菌属性。
应用操作：
医院耐药感染质控：用于医院检验科 ICU 患者样本（支气管肺泡灌洗液、中心静脉导管血、尿液）鉴定系统（质谱耐药数据库、ESBLs 基因 PCR 试剂盒）的性能验证，确保医院获得性 ESBLs 阳性肺炎克雷伯菌不被漏检或误判为敏感株，尤其适配 ICU 复杂样本中耐药株的精准识别；
抗 ESBLs AST 校准：校准抗耐药 AST 试剂（如碳青霉烯类药敏纸片、ESBLs 检测板）的 MIC 值，制定医院 ESBLs 阳性肺炎克雷伯菌感染用药方案（如避免使用第三代头孢菌素，优先选择美罗培南或哌拉西林 / 他唑巴坦联合阿米卡星），同时可用于 AST 仪器（如 VITEK 2 Compact）耐药判读标准的验证与优化；
耐药机制研究：用于 ESBLs 基因（TEM-1、SHV-12）表达调控、生物膜与耐药性协同机制（如外膜蛋白缺失导致的药物渗透障碍）研究，及新型抗 ESBLs 药物（如 β- 内酰胺酶抑制剂增强剂、新型碳青霉烯类）筛�。皆耗鸵└腥痉揽靥峁├砺垡谰荩�
医院感染培训：作为医院感染防控培训菌株，用于医务人员 “耐药菌环境定植检测”（如 ICU 物体表面采样验证）、“医疗器械消毒效果评价”（如呼吸机管路消毒后残留菌检测）等实操培训，及 “敏感株与耐药株表型差异” 对比教学，提升医院耐药感染防控意识与技术水平。
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