中文名称:格氏李斯特菌
拉丁学名:Listeria grayi
标准编号:ATCC25401
产品形式:冻干粉(含蔗糖 - 脱脂乳复合保护剂,降低冻干过程中菌体活性损伤,复苏率≥85%)
安全等级:2 级(条件致病性菌株,对健康人群感染风险较低,免疫功能低下人群需注意防护,适用于生物安全二级实验室(BSL-2)操作)
模式菌株:非模式菌株(是李斯特菌属中具有代表性的非致病性菌株,常作为李斯特菌属分类鉴定与致病性研究的对照菌株)
分类地位:隶属于李斯特菌科、李斯特菌属,与致病性的单核细胞增生李斯特菌同属一科,广泛存在于土壤、植物表面、食品加工环境及动物粪便中,是李斯特菌属中研究较多的非致病菌株
形态特征:菌落呈灰白色,直径 1-2mm,表面光滑、湿润,边缘整齐,质地均匀且半透明,在李斯特菌选择性培养基(如 PALCAM 培养基)上呈无色菌落,周围无溶血环(与单核细胞增生李斯特菌的 β- 溶血特性区分);菌体为革兰氏阳性,呈短杆状,大小约 0.5-0.8μm×1.0-2.0μm,常单个、成对或短链状排列,无芽孢,有周生鞭毛(25℃时运动活跃,呈 “翻筋斗” 样运动,37℃时运动能力减弱),需用相差显微镜或革兰氏染色观察。
生理特性:兼性厌氧菌,生长温度范围较宽(1-45℃,具备低温生长能力,可在冷藏环境中缓慢繁殖),最适生长温度 30-37℃,生长 pH 范围 5.5-9.0,耐盐性较强(可在含 10% NaCl 的培养基中生长);能发酵葡萄糖、麦芽糖、蔗糖等糖类产酸不产气,不发酵木糖、甘露醇,甲基红试验阳性,V-P 试验阳性,不产生吲哚,不分解尿素,触酶试验阳性;无致病性,不产生李斯特菌溶血素 O(LLO)等毒力因子,不能在巨噬细胞内寄生繁殖。
培养条件:推荐使用李斯特菌选择性培养基(如 PALCAM 培养基、Oxford 培养基)或营养琼脂培养基,37℃有氧培养 24-48h(普通培养箱静置培养即可,无需严格厌氧环境),培养后菌落生长密集,在选择性培养基上可抑制杂菌生长,便于纯培养分离;液体培养选用营养肉汤培养基,37℃振荡培养(转速 150-200rpm)18-24h,菌体浓度可达 10?CFU/mL;若需观察运动性,可在 25℃培养 24h。
活化步骤:无菌环境下(生物安全二级实验室生物安全柜内)开启安瓿管,用 0.5-1mL 无菌营养肉汤培养基(预热至 37℃)充分溶解菌粉,将菌液全部接种至营养琼脂平板,37℃培养 24h 后,挑取单个典型菌落转接至 5mL 营养肉汤培养基,37℃振荡培养 16h,即可获得高活性种子液(操作时避免菌液飞溅,防止气溶胶产生)。
保存方法:未启封冻干粉 2-8℃密封避光保存,有效期 4 年;复苏后斜面菌种 4℃密封保存,每 1-2 个月继代一次,有效期 2 个月;长期保存需将对数生长期菌液与 30% 无菌甘油按 1:1 体积比混合,分装至冻存管后 - 80℃冷冻保存,或真空冷冻干燥后 - 20℃保存,有效期均可达 3-5 年,严禁反复冻融(单次冻融活性损失≥25%)。
食品微生物检测:作为食品中李斯特菌检测的阴性对照菌株(与致病性单核细胞增生李斯特菌对比),用于验证李斯特菌选择性培养基的特异性、检测方法(如实时荧光定量 PCR、免疫磁珠分离法)的准确性,评估食品加工环境中李斯特菌的污染情况,为食品安全生产提供技术支撑。
微生物分类与鉴定研究:用于李斯特菌属的分类学研究,通过与其他李斯特菌(如单核细胞增生李斯特菌、无害李斯特菌)的生化特性、基因序列对比,明确李斯特菌属的系统发育关系;作为微生物鉴定试剂(如生化鉴定卡、质谱数据库)的校准菌株,确保鉴定结果的可靠性。
教学与科研实验:用于微生物学教学实验(如细菌运动性观察、低温生长试验、选择性培养基应用等),帮助学生掌握李斯特菌属的形态与生理特性;作为李斯特菌毒力因子研究的对照菌株,探索致病性李斯特菌毒力基因的表达调控机制,为李斯特菌病的防控研究提供实验模型。
每批次产品均通过三重质量检测:纯度检测(涂布营养琼脂与李斯特菌选择性培养基,确保无杂菌污染)、活性检测(平板计数法,确保活菌数≥10?CFU / 支)、特性验证(API Listeria 生化鉴定、16S rRNA 基因测序,符合格氏李斯特菌典型生理生化与基因特征),随货附带完整 COA(分析报告),质量可追溯。
操作需在生物安全二级实验室进行,实验人员需经专业培训,穿戴无菌手套、口罩与实验服,使用生物安全柜处理菌液;实验废弃物(含菌培养基、耗材)需经 121℃高压蒸汽灭菌 30min 后处理;若发生菌液泄漏,需立即用 75% 乙醇或含氯消毒剂擦拭消毒污染区域;收货后 24 小时内,若发现安瓿管破损、菌粉变色或复苏后无活菌,可立即联系售后办理退换货。


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