中文名称:西利杰李斯特菌(曾称 “希氏李斯特菌”)
拉丁学名:Listeria seeligeri
标准编号:ATCC35967
产品形式:冻干粉(含蔗糖 - 脱脂乳复合保护剂,减少冻干过程中菌体活性损伤,复苏率≥85%)
安全等级:2 级(条件致病性菌株,对健康人群无明确致病性,仅免疫缺陷人群存在极低感染风险,适用于生物安全二级实验室(BSL-2)常规操作)
模式菌株:非模式菌株(是李斯特菌属中具有代表性的非致病菌株,因独特的溶血特性与生化特征,成为李斯特菌属分类鉴定、环境微生物研究的关键参照菌株)
分类地位:隶属于李斯特菌科、李斯特菌属,与单核细胞增生李斯特菌同属一科,广泛存在于土壤、水体、植物表面及食品加工环境中,是李斯特菌属中研究较多的非致病代表菌株,因纪念微生物学家 Hermann Seeliger 而命名。
形态特征:菌落呈灰白色,直径 1-2mm,表面光滑、湿润,边缘整齐或轻微不规则,质地黏稠且半透明,在李斯特菌选择性培养基(如 PALCAM 培养基、Oxford 培养基)上呈无色菌落,在血琼脂平板上形成宽大的 β- 溶血环(与单核细胞增生李斯特菌的狭窄 β- 溶血环、无害李斯特菌的无溶血环形成关键区分,是西利杰李斯特菌的核心鉴别特征);菌体为革兰氏阳性,呈短杆状,大小约 0.5-0.8μm×1.0-2.0μm,常单个、成对或短链状排列,无芽孢,有周生鞭毛(20-25℃时运动活跃,呈 “翻筋斗” 样运动,37℃时运动能力显著减弱),革兰氏染色后显微镜下形态清晰。
生理特性:兼性厌氧菌,生长温度范围 1-42℃(具备一定低温生长能力,可在 4-10℃冷藏环境缓慢繁殖),最适生长温度 30-37℃,生长 pH 范围 5.5-9.0,耐盐性较强(可在含 8% NaCl 的培养基中生长);能发酵葡萄糖、麦芽糖、蔗糖产酸不产气,不发酵鼠李糖、木糖、甘露醇,甲基红试验阳性,V-P 试验阳性,不产生吲哚,不分解尿素,触酶试验阳性;无明确致病性,虽携带部分溶血相关基因(如溶血素基因),但缺乏单核细胞增生李斯特菌的核心毒力基因(如inlA、plcA),不能在人体巨噬细胞内寄生繁殖,也无法引起动物感染症状。
培养条件:推荐使用李斯特菌选择性培养基(如 PALCAM 培养基含头孢他啶、多粘菌素 B,Oxford 培养基含吖啶黄、多粘菌素 B)或血琼脂培养基,37℃有氧培养 24-48h(普通培养箱静置培养即可,无需厌氧环境,含 5% CO?可促进溶血环清晰形成),培养后在选择性培养基上可抑制杂菌,血琼脂平板上溶血特征典型;液体培养选用营养肉汤培养基或李斯特菌增菌肉汤(LEB),37℃振荡培养(转速 150-200rpm)18-24h,菌体浓度可达 10?CFU/mL;若需观察运动性,建议在 22℃培养 24h,运动特征更显著。
活化步骤:在生物安全二级实验室生物安全柜内操作,无菌环境下开启安瓿管,用 0.5-1mL 无菌营养肉汤培养基(预热至 37℃)充分溶解菌粉,将菌液全部接种至血琼脂平板,37℃培养 24h 后,挑取单个具有典型宽大 β- 溶血环的菌落转接至 5mL 李斯特菌增菌肉汤,37℃振荡培养 16h,即可获得高活性种子液(操作时避免菌液飞溅,防止气溶胶产生)。
保存方法:未启封冻干粉 2-8℃密封避光保存,有效期 4 年;复苏后斜面菌种 4℃密封保存,每 1-2 个月继代一次,有效期 2 个月;长期保存需将对数生长期菌液与 30% 无菌甘油按 1:1 体积比混合,分装至冻存管后 - 80℃冷冻保存,或真空冷冻干燥后 - 20℃保存,有效期均可达 3-5 年,严禁反复冻融(单次冻融活性损失≥25%)。
微生物分类与鉴定研究:作为李斯特菌属分类学研究的重要材料,通过与致病李斯特菌(如单核细胞增生李斯特菌)、其他非致病李斯特菌(如无害李斯特菌、格氏李斯特菌)的生化特性、基因序列对比,明确李斯特菌属的系统发育关系;作为微生物鉴定试剂(如生化鉴定卡、MALDI-TOF MS 质谱数据库)的校准菌株,验证鉴定方法的准确性,尤其用于区分具有溶血特性的非致病李斯特菌与致病菌株。
食品安全与环境监测:作为食品、环境样本中李斯特菌检测的阴性对照菌株(与单核细胞增生李斯特菌对比),用于验证李斯特菌选择性培养基的特异性、检测方法(如实时荧光定量 PCR、免疫磁珠分离法)的可靠性,评估食品加工环境(如车间台面、设备、冷链环节)中李斯特菌的污染组成,为食品安全风险分级提供数据支撑;同时可用于环境微生物多样性研究,探索其在土壤、水体中的分布规律与生态功能。
教学与科研实验:用于微生物学教学实验(如细菌溶血试验、运动性观察、选择性培养基应用、革兰氏染色),帮助学生掌握李斯特菌属的形态与生理特性,理解致病与非致病菌株的鉴别要点;作为李斯特菌溶血机制、低温适应性研究的模型菌株,探索其溶血素的功能特性与低温生长相关基因的表达调控,为李斯特菌属微生物的基础研究提供实验材料。
每批次产品均通过三重质量检测:纯度检测(涂布营养琼脂、李斯特菌选择性培养基及血琼脂平板,确保无杂菌污染且溶血特征典型)、活性检测(平板计数法,确保活菌数≥10?CFU / 支)、特性验证(API Listeria 生化鉴定、16S rRNA 基因测序,符合西利杰李斯特菌典型生理生化与基因特征,且确认无核心毒力基因),随货附带完整 COA(分析报告),质量可追溯。
操作需在生物安全二级实验室进行,实验人员需经专业培训,穿戴无菌手套、口罩与实验服,使用生物安全柜处理菌液;实验废弃物(含菌培养基、耗材)需经 121℃高压蒸汽灭菌 30min 后处理;若发生菌液泄漏,需立即用 75% 乙醇或 500mg/L 含氯消毒剂擦拭消毒污染区域;收货后 24 小时内,若发现安瓿管破损、菌粉变色或复苏后无典型溶血菌落,可立即联系售后办理退换货。


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