中文名称:犬小孢子菌
拉丁学名:Microsporum canis
标准编号:ATCC11621
产品形式:冻干孢子粉(含脱脂乳 - 蔗糖 - 酵母提取物复合保护剂,维持孢子休眠活性,复苏萌发率≥80%)
安全等级:2 级(致病性真菌,属皮肤癣菌,可引起人类与动物毛发、皮肤真菌感染,主要通过接触传播,免疫正常人群感染多表现为浅表癣症,免疫缺陷人群风险升高,需在生物安全二级实验室(BSL-2)按真菌操作规范处理)
模式菌株:非模式菌株(是犬小孢子菌中研究最广泛的菌株,为临床皮肤癣菌诊断、抗真菌药物筛选及兽医真菌病防控的核心参照菌株)
分类地位:隶属于子囊菌门、小孢子菌属,是常见的人畜共患皮肤癣菌,自然宿主以犬、猫等哺乳动物为主,也可感染人类,广泛存在于宠物毛发、皮屑及受污染的环境(如宠物窝、地毯)中,是临床浅表真菌感染的重要病原体之一。
形态特征:
菌落形态:在沙堡弱培养基(SDA)上 25℃培养 7-14 天,菌落呈淡黄色至橙黄色,直径 3-5cm,表面呈绒毛状或棉絮状,边缘不规则,背面呈深黄色至橙褐色(色素扩散显著,是鉴别关键特征);
微观形态:菌丝为有隔菌丝,直径 2-4μm,呈分枝状;可产生两种孢子 ——大分生孢子(典型特征):梭形,大小 40-150μm×8-15μm,壁厚,表面有小刺,含 6-15 个分隔,两端尖锐;小分生孢子:椭圆形,大小 3-5μm×2-3μm,单个或成簇生于菌丝侧面,数量较少;革兰氏染色呈阳性(真菌通用染色特性),乳酸酚棉蓝染色后菌丝与孢子形态清晰可辨。
生理特性:
专性需氧真菌,最适生长温度 25-30℃(室温培养即可,37℃下生长缓慢,孢子萌发率下降),生长 pH 范围 5.0-7.5(偏酸性环境利于生长);
营养需求简单,可利用葡萄糖、麦芽糖等糖类作为碳源,能分解角蛋白(皮肤、毛发的主要成分),是其感染宿主皮肤的关键代谢能力;
对常用抗真菌药物(如伊曲康唑、特比萘芬、咪康唑)敏感性较高,对青霉素、头孢类抗生素不敏感(真菌与细菌细胞壁结构差异导致);
致病性明确:通过孢子接触黏附宿主皮肤,萌发后产生菌丝侵入角质层,分泌蛋白酶、脂肪酶分解组织,引起红斑、脱屑、毛发脱落等症状,人类感染多表现为头癣、体癣,动物感染以犬猫脱毛性皮癣为主。
培养条件:
推荐使用沙堡弱培养基(SDA,含葡萄糖、蛋白胨、琼脂,pH5.6)或加有氯霉素的 SDA 培养基(抑制细菌污染),25℃有氧培养 7-14 天(需避光培养,光照会抑制色素合成与孢子形成);
液体培养选用沙堡弱肉汤培养基,25℃振荡培养(转速 80-100rpm,低速避免菌丝断裂)10-12 天,菌体以菌丝团形式存在,培养液呈淡黄色浑浊状;
若需诱导孢子产生,可在培养基中添加毛发碎片(模拟宿主角质环境),培养 10 天后孢子产量显著提升。
活化步骤:
在 BSL-2 实验室生物安全柜内操作,无菌环境下开启冻干管,用 0.5-1mL 无菌沙堡弱肉汤培养基(预热至 25℃)充分溶解孢子粉,将菌液全部涂布于 SDA 平板,25℃培养 10 天;
挑取菌落边缘新鲜菌丝(避免老化菌丝),转接至新的 SDA 斜面,25℃培养 7 天,获得高活性纯培养物(操作时需戴无菌手套,避免孢子气溶胶吸入)。
保存方法:
未启封冻干孢子粉 4℃密封避光保存,有效期 3 年;
复苏后斜面菌种:4℃密封保存,每 2 个月继代一次,有效期 1 个月(频繁继代易导致孢子产量下降);
长期保存:采用液氮冷冻保存(将菌丝 - 孢子混合物与 10% 甘油混合,分装后投入液氮)或沙土管保存(孢子接种于灭菌沙土中,4℃保存),有效期可达 2-3 年,严禁反复冻融(单次冻融孢子萌发率下降≥30%)。
临床诊断与质控:
作为临床真菌实验室的标准参照菌株,用于验证皮肤癣菌检测方法(如直接镜检、真菌培养鉴定、PCR 分型)的准确性,评估诊断试剂(如真菌抗原检测试纸、质谱鉴定数据库)的灵敏度;
用于临床分离株的比对分析,辅助确诊犬小孢子菌感染病例,区分其他小孢子菌(如石膏样小孢子菌)引起的癣症,符合 GB/T 19625-2005《动物布鲁氏菌病诊断技术》(延伸适用于兽医真菌病诊断)及 CLSI M38-A3《抗真菌药物敏感性试验标准》要求。
抗真菌药物研发:
用于体外抗真菌药物敏感性试验(AST),筛选新型抗真菌化合物(如植物源提取物、合成抗菌剂),评估药物对菌丝生长与孢子萌发的抑制效果;
作为药物作用机制研究的模型菌株,探索药物对真菌细胞壁(如几丁质合成)、细胞膜(如麦角固醇合成)的作用靶点,为抗真菌药物研发提供实验基础。
兽医与公共卫生研究:
用于宠物医院(犬猫诊疗)的真菌病防控研究,评估消毒产品(如含氯消毒剂、季铵盐类)对环境中犬小孢子菌孢子的杀灭效果,制定宠物饲养环境的消毒规范;
研究人畜共患传播机制,探索宠物 - 人类接触传播的风险因素,为公共卫生部门制定皮肤癣菌病防控策略提供数据支撑。
教学与科研实验:
用于微生物学(真菌学方向)教学实验,观察真菌菌丝、孢子形态,学习真菌培养与鉴定技术,帮助学生理解皮肤癣菌的致病性;
作为真菌代谢机制研究的模型菌株,探索角蛋白酶分泌调控、色素合成途径,为真菌致病机制研究提供理论基础。
质量检测:
纯度检测:涂布 SDA 平板与营养琼脂平板,确保无真菌杂菌与细菌污染,显微镜下仅见犬小孢子菌特征菌丝与孢子;
活性检测:孢子萌发率测定(SDA 培养基上培养 48h,萌发率≥80%),菌丝生长速率测定(25℃培养 7 天,菌落直径≥3cm);
特性验证:通过形态学鉴定(大分生孢子梭形带刺)、生化试验(能利用尿素,不利用乳糖)及 18S rRNA 基因测序,确认菌株分类地位;
随货附带完整 COA(分析报告),质量可追溯。
安全操作规范:
操作需在 BSL-2 实验室进行,实验人员需经真菌安全培训,穿戴无菌手套、口罩、护目镜,全程在生物安全柜内处理(避免孢子扩散);
实验废弃物(含菌培养基、耗材、防护用品)需经 121℃高压蒸汽灭菌 60min(真菌孢子耐高温,延长灭菌时间)或用 5% 次氯酸钠浸泡 24h 后处理;
若发生孢子泄漏,立即用含氯消毒剂擦拭污染区域,通风 30 分钟以上,暴露人员需清洗皮肤,监测是否出现皮疹等感染症状;
收货后 24 小时内,若发现冻干管破损、孢子粉变色(非淡黄色)或复苏后无典型菌落与孢子,需在生物安全柜内妥善处理,并联系售后按致病性真菌运输规范办理退换货。


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