形态:革兰氏阳性球菌,显微镜下呈不规则葡萄串状排列(分裂后菌体不立即分离),无芽孢与鞭毛,部分菌体表面可形成薄荚膜(需荚膜染色观察)。在普通营养琼脂上形成直径 1.0-2.5mm 的金黄色不透明菌落,质地厚实、表面光滑凸起;血琼脂培养基上显典型 β- 溶血(菌落周围形成 2-4mm 宽透明溶血环);含甲氧西林的选择性培养基上生长受抑制(区别于 MRSA)。
生理生化:兼性厌氧微生物,最适生长温度 35-37℃(适配人体体温),最适 pH7.0-7.5,对营养要求低,普通营养琼脂、LB 培养基、TSB 培养基中均可良好生长,耐盐性较强(可在 7.5%-10% 氯化钠培养基中生长)。触酶试验阳性(分解过氧化氢产氧,区别于链球菌),凝固酶试验阳性(能使兔血浆凝固,判定致病性),氧化酶试验阴性,硝酸盐还原试验阳性;可发酵葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、乳糖(产酸不产气),不发酵阿拉伯糖、木糖;对 β- 内酰胺类药物(青霉素、头孢唑林)敏感,同时可产 α- 溶血毒素、肠毒素等毒力因子,具一定生物膜形成能力,是临床常见皮肤软组织感染、呼吸道感染的致病菌株模型。
培养基:常规培养选用营养琼脂或 LB 培养基(满足基础生长需求);临床样本分离或纯度验证时,可选用血琼脂培养基(观察溶血特性)或含 7.5% 氯化钠的甘露醇高盐琼脂培养基(选择性分离,该菌株可发酵甘露醇使培养基变黄);耐药性检测需用 MH 培养基(验证对甲氧西林的敏感性)。
操作:固体培养需 35-37℃恒温静置 18-24 小时(生长速度较 MRSA 略快,无需延长培养);液体培养采用 35-37℃、150-180rpm 摇床振荡培养 16-20 小时,培养后期菌液呈均匀浑浊状,菌浓度可达 10?-10??CFU/mL,能最大程度保留毒力因子表达(如溶血毒素、肠毒素)。传代次数建议不超过 5 代,严格控制温度波动≤±1℃,避免因传代过多导致色素生成减弱或凝固酶活性下降。
短期(1-2 周):取培养 18 小时的纯培养菌株(确保金黄色菌落与 β- 溶血特性),接种至营养琼脂斜面培养基,35-37℃培养 12 小时后,密封置于 4℃冰箱冷藏保存。每 3-4 天观察一次,若发现菌落干燥、污染或色素变淡,需及时重新接种纯化。
长期(3 年以上):推荐两种高效方法:①冷冻干燥保存法:取对数生长期菌液(OD600=0.8-1.0),与含 10% 脱脂乳 + 0.5% 酵母提取物的复合保护剂按 1:1 体积比混匀,分装至无菌冷冻管(每管 0.5mL),经 - 20℃预冻 3 小时、-80℃冷冻 6 小时梯度降温后冷冻干燥,干燥后置于 - 80℃冰箱保存,保存期限可达 5-8 年;②甘油冷冻保存法:将对数生长期菌液与无菌甘油(终浓度 20%)混合均匀,分装至无菌冷冻管,直接置于 - 80℃冰箱保存,保存期限 3-5 年。长期保存需每 12 个月复苏一次,复苏后通过革兰氏染色、菌落形态观察、凝固酶试验及甲氧西林敏感性检测,验证菌株纯度与生理活性。


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