形态：革兰氏阳性球菌，显微镜下呈密集葡萄串状排列（较中间葡萄球菌排列更紧密），无芽孢与鞭毛，部分菌体表面具厚荚膜（经印度墨汁负染易观察），大小约 0.8-1.2μm。在普通营养琼脂上形成直径 1.2-2.5mm 的乳白色至乳黄色菌落，质地致密、表面光滑凸起，边缘整齐且具轻微光泽；在血琼脂培养基上表现为强 β- 溶血（菌落周围形成 3-4mm 宽透明溶血环，溶血活性显著强于中间葡萄球菌）；在含 7.5% 氯化钠的甘露醇高盐琼脂培养基上可生长（耐盐性强），且可缓慢发酵甘露醇（24-48 小时培养基变黄，与中间葡萄球菌不发酵甘露醇的特性明确区分）；在麦康凯培养基上不生长（与革兰氏阴性肠道菌区分），此溶血强度与甘露醇发酵差异是关键鉴别标志。
生理生化：兼性厌氧微生物，最适生长温度 37-38℃（更适配犬体温，30-40℃范围内均可生长），最适 pH 值 7.0-7.6，对营养要求低，在普通营养琼脂、LB 培养基、TSB 培养基中生长速度快于中间葡萄球菌。生化反应中，触酶试验阳性（强阳性反应，气泡生成量大），凝固酶试验阳性（能使犬血浆在 2-4 小时内快速凝固，凝固速度快于中间葡萄球菌），氧化酶试验阴性，硝酸盐还原试验阳性，甲基红试验强阳性，VP 试验阳性（较中间葡萄球菌的弱阳性更明显）；糖类发酵方面，可发酵葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、甘露醇（缓慢发酵，产酸不产气），不发酵乳糖、阿拉伯糖、木糖；毒力特性上，携带犬源特异性毒力基因（如凝固酶基因 coa、溶血素基因 hlg、表皮剥脱毒素基因 expA），生物膜形成能力极强（易附着于犬皮肤毛囊、耳道黏膜及兽医医疗器械表面），主要引发犬脓皮症、外耳道炎、伤口感染，偶可通过密切接触传播给犬主人（引发免疫功能低下人群皮肤局部感染），是人兽共患病高风险菌株（风险高于中间葡萄球菌）。
培养基：常规培养优先选用营养琼脂或 LB 培养基（37-38℃培养 16-20 小时，满足快速增殖需求）；犬源样本分离（如皮肤脓汁、耳道拭子）推荐使用血琼脂培养基（重点观察强 β- 溶血环）；与中间葡萄球菌鉴别需使用甘露醇高盐琼脂培养基（利用甘露醇发酵差异区分）；药物敏感性试验（兽用药物）需采用 MH 培养基（符合 CLSI 兽医标准，确保药敏结果准确性）；生物膜研究可选用犬皮肤上皮细胞培养板（模拟体内感染环境，提升研究相关性）。
操作：固体培养置于 37-38℃恒温培养箱静置 16-20 小时，可形成形态典型的单菌落（血琼脂上需重点记录溶血环宽度）；液体培养采用 37-38℃、180-200rpm 摇床振荡培养 14-18 小时（振荡速率高于中间葡萄球菌，需充足氧气促进生长），培养后期菌液呈均匀浑浊状，菌浓度可达 10??-10??CFU/mL，且能最大程度保留强溶血活性与生物膜形成能力。传代次数建议控制在 4 代以内（少于中间葡萄球菌的 5 代），温度波动需≤±0.5℃，避免因传代过多或温度偏差导致溶血活性减弱、甘露醇发酵能力丢失或毒力基因表达下降。
短期（1-2 周）：取 37-38℃培养 16 小时的纯培养菌株（需确认强 β- 溶血、甘露醇发酵阳性），接种至营养琼脂斜面培养基，37℃培养 10 小时后，密封斜面管口置于 4℃冰箱冷藏保存。每 2-3 天观察一次菌株状态（观察频率高于中间葡萄球菌），若发现菌落干燥、污染、溶血环变窄或甘露醇发酵延迟，需及时重新接种（优先在 37-38℃条件下复壮），防止菌株失活或特性改变。
长期（3 年以上）：推荐两种高效保存方法：①冷冻干燥保存法：取对数生长期菌液（OD600=0.9-1.1，培养 14 小时），与含 10% 脱脂乳 + 0.8% 酵母提取物 + 0.1% 甘露醇（保护甘露醇发酵相关酶与毒力蛋白）的复合保护剂按 1:1 体积比充分混匀，分装至无菌冷冻管（每管 0.5mL），经 - 20℃预冻 4 小时、-80℃冷冻 8 小时梯度降温后进行冷冻干燥，干燥完成后置于 - 80℃冰箱保存，保存期限可达 5-8 年，复苏后强 β- 溶血活性与甘露醇发酵能力保留率≥98%；②甘油冷冻保存法：将对数生长期菌液与无菌甘油（终浓度 25%，高于中间葡萄球菌的 20%，增强抗冻性）混合均匀，分装至无菌冷冻管（每管 1mL），直接放入 - 80℃冰箱保存，保存期限 3-5 年，操作简便（复苏时需接种至血琼脂与甘露醇高盐琼脂双培养基，同时验证核心特性）。长期保存需每 10 个月复苏一次（复苏频率高于中间葡萄球菌），复苏后通过革兰氏染色、溶血试验、甘露醇发酵试验、凝固酶试验及犬皮肤细胞黏附试验，全面确认菌株纯度、生理活性与犬源致病性，确保后续实验使用效果。
客服1