形态：革兰氏阳性球菌，显微镜下呈链状排列（长短不一，短链 3-5 个菌体，长链可达 10 个以上，与葡萄球菌的葡萄串状排列明确区分），无芽孢与鞭毛，部分菌株表面具厚荚膜（经荚膜染色易观察，与松鼠葡萄球菌的极薄荚膜区分），大小约 0.6-1.0μm。在普通营养琼脂上生长较弱，形成直径 0.5-1.0mm 的灰白色半透明菌落，质地柔软、表面光滑，边缘整齐；在血琼脂培养基上表现为典型 β- 溶血（菌落周围形成 2-3mm 宽透明溶血环，溶血活性均匀，与葡萄球菌的溶血特性一致但排列不同）；在麦康凯培养基上不生长（与革兰氏阴性肠道菌区分）；在 GBS 选择性培养基（含庆大霉素、萘啶酸）上可优势生长（抑制杂菌，辅助鉴别），此链状排列、B 群抗原阳性是关键鉴别标志。
生理生化：兼性厌氧微生物，最适生长温度 35-37℃（适配人体与动物体温，30-40℃范围内均可生长），最适 pH 值 7.2-7.6，对营养要求较高，需在含血清或血液的培养基中生长良好（普通营养琼脂上生长缓慢，与松鼠葡萄球菌的低营养耐受区分）。生化反应中，触酶试验阴性（核心鉴别特征，与葡萄球菌的触酶阳性明确区分），氧化酶试验阴性，硝酸盐还原试验阴性，VP 试验阳性；关键生化特性为分解乳糖、蔗糖（产酸不产气），不分解甘露醇、阿拉伯糖，CAMP 试验阳性（与金黄色葡萄球菌 β- 溶血素协同作用，形成箭头状溶血区，辅助鉴别）；毒力特性上，携带母婴感染相关毒力基因（如荚膜多糖基因 cps、溶血素基因 cylE、黏附素基因 sip），对人类生殖道上皮细胞及动物乳腺上皮细胞黏附能力强，人类中主要引发新生儿败血症、脑膜炎及产妇子宫内膜炎，动物中引发牛、羊乳腺炎，是人兽共患病风险菌株（风险高于松鼠葡萄球菌）。
培养基：常规培养优先选用血琼脂培养基或含 5% 马血清的 LB 培养基（35-37℃培养 24-30 小时，满足营养需求）；临床生殖道样本（如阴道拭子）分离推荐使用 GBS 选择性培养基（抑制杂菌，提升检出率）；动物乳腺样本分离可选用含血清的乳腺上皮细胞培养基（模拟感染环境）；药物敏感性试验需采用 MH 血琼脂培养基（符合 CLSI 人用 / 兽医标准，确保药敏结果准确性）；CAMP 试验需搭配金黄色葡萄球菌 ATCC25923 菌株（阳性对照）。
操作：固体培养置于 35-37℃、含 5% CO?的恒温培养箱（CO?促进荚膜形成与溶血活性，与松鼠葡萄球菌的无需 CO?区分）静置 24-30 小时，可形成形态典型的单菌落（血琼脂上重点观察溶血环与链状排列）；液体培养采用 35-37℃、120-150rpm 摇床振荡培养 20-24 小时（振荡速率低于葡萄球菌，避免链状断裂），培养后期菌液呈轻微浑浊状（含血清时浊度略高），菌浓度可达 10?-10?CFU/mL，且能最大程度保留荚膜结构与毒力活性。传代次数建议控制在 4 代以内（少于松鼠葡萄球菌的 5 代），温度波动需≤±1℃，避免因传代过多导致溶血活性减弱或荚膜丢失。
短期（1-2 周）：取 35-37℃培养 24 小时的纯培养菌株（需确认 β- 溶血、触酶阴性、CAMP 阳性），接种至含血清的营养琼脂斜面培养基，35℃培养 18 小时后，密封斜面管口置于 4℃冰箱冷藏保存。每 2-3 天观察一次菌株状态（观察频率高于松鼠葡萄球菌），若发现菌落干燥、污染、溶血活性减弱，需及时重新接种（35-37℃、CO?环境复壮），防止菌株因营养不足失活。
长期（3 年以上）：推荐两种高效保存方法：①冷冻干燥保存法：取对数生长期菌液（OD600=0.6-0.8，培养 24 小时，含血清培养基），与含 10% 脱脂乳 + 0.5% 酵母提取物 + 5% 马血清（保护荚膜与毒力蛋白）的复合保护剂按 1:1 体积比充分混匀，分装至无菌冷冻管（每管 0.5mL），经 - 20℃预冻 4 小时、-80℃冷冻 8 小时梯度降温后进行冷冻干燥，干燥完成后置于 - 80℃冰箱保存，保存期限可达 5-7 年，复苏后 β- 溶血活性与 CAMP 试验阳性率≥95%；②甘油冷冻保存法：将对数生长期菌液与无菌甘油（终浓度 25%，高于松鼠葡萄球菌的 20%，增强抗冻性）混合均匀，分装至无菌冷冻管（每管 1mL），直接放入 - 80℃冰箱保存，保存期限 3-4 年，操作简便（复苏时需接种至血琼脂培养基，CO?环境培养复壮）。长期保存需每 10 个月复苏一次（复苏频率高于松鼠葡萄球菌），复苏后通过革兰氏染色（确认链状排列）、触酶试验、CAMP 试验、溶血试验及荚膜染色，全面确认菌株纯度、生理活性与致病特性，确�：笮笛槭褂眯Ч�。
客服1