形态特征:菌体呈直杆或稍弯曲状,大小约(0.5-1.9)μm×(3.0-17)μm,两端钝圆,常单个或成对排列;芽孢为椭圆形,位于菌体次极端,不膨出或轻微膨出胞壁,芽孢具有极强的抗逆性,能在干燥、高温等恶劣环境中存活数月至数年。
生化特性:严格厌氧,最适生长温度为 35-37℃,最适 pH 值 7.0-7.5;可发酵葡萄糖、果糖产酸,不发酵乳糖、蔗糖,能产生卵磷脂酶和透明质酸酶,不产生触酶,硝酸盐还原试验阴性,吲哚试验阴性,这些生化特征是菌株鉴定的重要依据。
致病性相关:ATCC 9689 为非产毒标准株(不产生毒素 A 和毒素 B),无临床致病性,主要用于与产毒菌株的对比研究,帮助建立毒素检测方法的阴性对照,避免误判临床样本中的致病性艰难梭菌。
培养要求:需使用厌氧培养体系(如厌氧培养箱、厌氧袋),推荐培养基为艰难梭菌选择性培养基(CCFA 培养基,含环丝氨酸、头孢西丁、果糖和卵黄),接种后 37℃厌氧培养 48-72 小时,菌落呈黄色、圆形、边缘不整齐,表面粗糙,伴有特殊臭味。
保存方法:短期保存(1-2 周)可将菌株接种于庖肉培养基,37℃厌氧培养 24 小时后,置于 4℃冰箱;长期保存建议采用冻干保存或甘油冷冻保存(20% 甘油,-80℃),冻干菌株复苏时需用庖肉培养基或哥伦比亚血琼脂,在厌氧环境下逐步复温培养。
微生物检测质控:用于临床实验室艰难梭菌分离鉴定的阳性对照、药敏试验的标准菌株,验证培养基(如 CCFA)和检测试剂(如毒素 ELISA 试剂盒)的有效性。
科学研究:作为非产毒对照菌株,用于产毒菌株(如 ATCC BAA-1870)的致病性机制研究,包括芽孢萌发、细菌定植、毒素作用等;也可用于抗菌药物(如万古霉素、非达霉素)的体外活性评价。
教学实验:用于微生物学教学中厌氧细菌的培养、形态观察、生化鉴定等实验,帮助学生掌握厌氧微生物的操作技术和特性。
该菌株虽为非产毒株,但仍属于机会致病菌,操作时需在生物安全二级(BSL-2)实验室进行,佩戴手套、口罩,避免气溶胶产生;实验结束后,所有污染材料(培养基、耗材)需经 121℃高压灭菌 30 分钟或含氯消毒剂(有效氯 1000mg/L)处理后再丢弃。
菌株复苏和传代过程中,需严格控制厌氧环境,避免杂菌污染;若发现培养物异常(如菌落形态改变、异味加重),应立即停止使用并重新复苏冻干菌株。
储存菌株的冰箱、冰柜需明确标识,避免与其他微生物菌株混淆;操作人员需经过专业培训,熟悉厌氧培养操作规范和生物安全防护要求。


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