形态特征:菌体呈短杆状,大小约(0.6-2.4)μm×(1.3-19.0)μm,两端钝圆,常单个、成对或短链状排列;芽孢为椭圆形,位于菌体次极端或中央,芽孢直径通常不超过菌体宽度,无鞭毛,不能运动,在适宜条件下可快速形成芽孢,芽孢对高温、干燥及化学消毒剂具有极强抗性,可在环境中存活数年。
生化特性:严格厌氧,最适生长温度为 37-45℃(具有一定嗜热性,45℃时生长最快),最适 pH 值 7.2-7.6;具有极强的发酵能力,可发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖等多种糖类产酸产气,在庖肉培养基中培养时能迅速分解肉渣中的糖类,产生大量气体(主要为氢气和二氧化碳),使培养基出现剧烈产气现象;能产生卵磷脂酶(α 毒素),在卵黄琼脂平板上可形成特征性的 “乳光环”,不产生触酶,硝酸盐还原试验阳性,吲哚试验阴性,这些生化特征是菌株快速鉴定的核心依据。
致病性相关:ATCC 13124 为产毒菌株,主要产生 α 毒素(磷脂酶 C),该毒素可破坏细胞膜结构,导致细胞溶解、组织坏死,同时具有溶血活性;此外,菌株还可能产生少量其他次要毒素,但其致病性主要依赖 α 毒素。该菌株无临床强致病性,主要用于与强毒产气荚膜梭菌(如引起气性坏疽的菌株)的对比研究,以及毒素检测方法的阳性对照与质控。
培养要求:需采用严格厌氧培养体系(如厌氧培养箱、厌氧罐,辅以厌氧产气袋),推荐培养基包括庖肉培养基(用于菌株复苏与增菌)、卵黄琼脂培养基(用于菌株分离与鉴定,观察 “乳光环”)、哥伦比亚血琼脂培养基(用于观察溶血现象)。接种后在 37-45℃厌氧环境下培养 18-24 小时,菌落呈圆形、光滑、边缘整齐,直径 2-4mm,在血琼脂平板上可形成双层溶血环(内层完全溶血,外层不完全溶血),在卵黄琼脂平板上围绕菌落出现乳白色浑浊的 “乳光环”。
保存方法:短期保存(1-4 周)可将活化后的菌株接种于庖肉培养基,37℃厌氧培养 24 小时后,密封培养基管口,置于 4℃冰箱冷藏保存;长期保存建议采用冻干保存或甘油冷冻保存,冻干保存需使用含保护剂(如脱脂乳、蔗糖)的冻干管,冻干后置于 - 20℃以下环境保存;甘油冷冻保存需将菌株菌液与 20% 无菌甘油按 1:1 比例混合,分装后置于 - 80℃冰箱保存。冻干菌株复苏时,需用无菌生理盐水或庖肉培养基溶解冻干物,在厌氧环境下 37℃培养 12-24 小时后再转接至固体培养基纯化。
微生物检测与质控:作为临床实验室产气荚膜梭菌分离鉴定的阳性对照菌株,用于验证培养基(如卵黄琼脂、血琼脂)的有效性及检测方法(如生化鉴定、毒素 ELISA 检测)的准确性;同时可作为食品卫生检测中的质控菌株,评估食品(如肉类、乳制品)中产气荚膜梭菌的污染检测方法可靠性。
科学研究:用于产气荚膜梭菌毒素(尤其是 α 毒素)的制备、纯化及作用机制研究,包括毒素对细胞的损伤途径、受体结合特性等;也可用于抗菌药物(如甲硝唑、青霉素类药物)的体外活性评价,筛选针对产气荚膜梭菌感染的有效治疗药物;此外,还可用于益生菌对产气荚膜梭菌的抑制作用研究,为肠道微生态调控提供实验依据。
教学与行业标准制定:在微生物学教学中,用于厌氧细菌的形态观察、生化反应演示(如产气试验、溶血试验、“乳光环” 观察)及厌氧培养技术教学,帮助学生掌握厌氧微生物的特性与操作要点;同时,该菌株的标准数据(如生化反应结果、毒素活性)可作为行业标准制定的参考依据,规范产气荚膜梭菌相关检测与研究的技术流程。
该菌株虽为标准弱毒株,但仍具有一定致病性,且其产生的 α 毒素具有细胞毒性,操作时需在生物安全二级(BSL-2)实验室进行,操作人员需佩戴无菌手套、口罩及护目镜,避免皮肤直接接触菌液或毒素,同时防止气溶胶产生(如避免剧烈振荡培养物、使用带滤膜的移液器吸头);实验结束后,所有污染的培养基、耗材(如移液器吸头、培养皿)需经 121℃高压灭菌 30 分钟,或用含氯消毒剂(有效氯 2000mg/L)浸泡处理 1 小时以上,实验台面需用 75% 乙醇或含氯消毒剂擦拭消毒。
菌株复苏与传代过程中,需严格维持厌氧环境(厌氧培养箱内氧气浓度需低于 1%),避免因氧气暴露导致菌株活力下降或杂菌污染;若发现培养物出现异常(如菌落形态改变、无 “乳光环” 或溶血现象、出现异味),应立即停止使用,重新复苏冻干菌株,防止菌株变异或污染影响实验结果。
储存菌株的冰箱、冰柜需明确标识(标注菌株名称、编号、保存日期),与其他微生物菌株分区存放,避免交叉污染;冻干菌株需密封保存,防止吸潮失效;操作人员需经过专业培训,熟悉厌氧微生物操作规范、生物安全防护要求及应急处理措施(如皮肤接触菌液后立即用肥皂水清洗,吸入气溶胶后及时就医)。


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