形态与生化:菌体呈球形或椭圆形,直径 0.6-1.0μm,典型排列方式为成对或短链状(链长 2-4 个细胞),无芽孢,无鞭毛(无运动性,与部分杜兰斯肠球菌菌株差异显著)。最适生长温度 30-37℃,耐受温度范围 10-45℃,适宜 pH 6.0-8.0,兼性厌氧环境下均能生长(有氧条件下菌落形成速度更快);生化反应具有鲜明特异性:可发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖产酸(不产气),不发酵甘露醇、山梨醇,触酶阴性,氧化酶阴性,硝酸盐还原试验阴性;具备强耐逆性,能在含 6.5% 氯化钠的高渗培养基中正常生长,可耐受 40% 胆汁盐,且能在 pH 9.6 的碱性环境中存活,这些特征是其与肠球菌属内粪肠球菌、屎肠球菌等菌种精准区分的核心依据。
致病性相关:属于低毒力条件致病菌,自然定植于乳制品(如奶酪、酸奶)、发酵肉制品及人和反刍动物肠道中,对健康人群无致病风险;仅在机体免疫功能极度低下(如重症监护患者、长期使用免疫抑制剂人群)时,偶发尿路感染、腹腔感染等轻度感染;ATCC 6056 毒力稳定且极低,主要用于临床致病肠球菌毒力机制研究的阴性对照,及食品中肠球菌污染检测的阳性标准株。
培养:无需特殊气体环境,常规有氧培养即可满足需求。推荐培养基包括:脑心浸液琼脂(BHI,用于菌株活化与纯培养)、麦康凯琼脂(MAC,因不发酵乳糖,菌落呈无色透明,直径 0.8-1.2mm)、肠球菌选择性培养基(如叠氮钠血琼脂,可抑制杂菌生长,凸显目标菌株)。37℃培养 24-36 小时后,BHI 琼脂上菌落呈圆形、乳白色、表面光滑且有轻微光泽,边缘整齐,质地柔软;在血琼脂平板上可形成清晰的 α- 溶血环(草绿色,直径 1-2mm),无 β- 溶血现象,这是其重要的培养特征之一。
保存:短期保存(1-4 周):将活化后的纯菌株接种至 BHI 琼脂斜面,37℃培养 18-24 小时后,密封斜面管口,置于 4℃冰箱冷藏,期间需每 2 周观察 1 次,防止杂菌污染或菌株失活;长期保存(1 年以上):采用 - 80℃甘油冷冻保存(20% 无菌甘油与对数期菌液按 1:1 体积混合,分装至无菌冻存管),或冻干保存(以 10% 脱脂乳为保护剂,冻干后置于 - 20℃以下环境)。复苏时,需将冻存菌液或冻干菌粉接入 BHI 肉汤,37℃振荡培养 12-16 小时(转速 180-200rpm),待菌液 OD600 值达 0.6-0.8(对数生长期)后,转接至固体培养基纯化,确保菌株纯度与活性符合实验要求。
应用:在食品检测领域,作为乳制品、发酵食品中杜兰斯肠球菌定性定量检测的质控菌株,验证选择性培养基(如叠氮钠血琼脂)、生化鉴定试剂盒(如 API 20 Strep)的有效性与准确性;在食品工业中,用于研究杜兰斯肠球菌的产酸能力、抗菌肽(细菌素)合成特性,为发酵乳制品(如硬质奶酪)的工艺优化提供实验依据;在微生物科研中,作为肠球菌属系统发育研究的模式菌株,用于肠球菌耐药基因筛查、肠道菌群互作机制探索;此外,还可作为微生物教学实验的经典菌株,演示革兰氏阳性球菌的形态观察、耐盐耐胆盐试验及溶血反应等实验操作。
安全:常规操作可在生物安全一级(BSL-1)实验室进行;若涉及大规模发酵培养(如 500mL 以上菌液)或可能产生气溶胶的操作(如高速离心、菌液移液),需升级至 BSL-2 实验室防护。操作人员需佩戴无菌手套、一次性口罩,必要时佩戴护目镜;避免菌液接触破损皮肤,操作后需用 75% 乙醇消毒手部。实验后,所有污染耗材(培养皿、吸头、离心管)需经 121℃高压灭菌 30 分钟,实验台面用含氯消毒剂(有效氯 1000mg/L)擦拭消毒,再用 75% 乙醇二次消毒。菌株储存需单独存放于专用冰箱,冻存管外标注清晰(菌株名称、编号、保存日期、操作人员),防止与其他菌株交叉污染。


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