培养基选择与制备：推荐使用沙门氏菌显色培养基（如科玛嘉沙门氏菌显色培养基），可快速区分沙门氏菌（紫色菌落）与杂菌，提高分离效率；若需进行血清型鉴定，需搭配 SS 琼脂（无色半透明菌落，中心有黑色沉淀）与麦康凯琼脂（无色菌落）。制备 SS 琼脂时，需注意胆盐浓度控制在 0.8%（浓度过高会抑制菌株生长，过低则无法有效抑制杂菌），灭菌后需趁热摇匀，避免琼脂凝固时出现分层。
复苏与浓度校准技巧：冻干菌粉复苏时，需用无菌缓冲蛋白胨水（BPW）溶解（BPW 能中和样品中的抑菌物质，保护菌体活性），37℃静态培养 6~8 小时（前增菌阶段，恢复菌体活力），再转接至亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）中 37℃培养 18~24 小时（选择性增菌，抑制杂菌生长），最后涂布于显色培养基计数。若浓度偏离 log3 级别（误差＞±0.1 log），需排查增菌时间是否不足（前增菌不足会导致菌体复苏不充分）或涂布量是否精准（建议取 0.2mL 增菌液涂布，避免菌落过于密集难以计数）。
血清型鉴定操作要点：挑取显色培养基上的典型菌落（紫色、直径 1~2mm），用生理盐水制成菌悬液（浓度为麦氏比浊管 1 号标准），依次加入沙门氏菌 O 多价血清、H 多价血清进行玻片凝集试验。若出现明显凝集（液体由浑浊变为清亮，出现肉眼可见凝集颗粒），则可初步判定为沙门氏菌，再通过单价血清进一步确定鼠伤寒血清型（O 4,5,12：H i：1,2），确保菌株血清型与标准一致。
安全管控等级：该菌株属高致病性菌，需 BSL-2 实验室操作，所有涉及菌体的操作（如菌液稀释、涂布接种）必须在生物安全柜内进行，操作人员需穿全包裹式防护服、戴 N95 口罩及防护眼镜，避免皮肤直接接触或吸入气溶胶引发实验室感染；实验结束后需用 75% 乙醇对生物安全柜内部及操作工具进行彻底消毒，作用 15 分钟后再进行后续清洁。
废弃物处理要求：含菌培养物（如增菌液、菌落刮取物）需先在 121℃高压灭菌 30 分钟（确保杀灭菌体及内毒素），冷却后再倒入专用医疗废弃物收集桶；实验耗材（如移液器吸头、培养皿）需放入耐高温灭菌袋中，灭菌后再按有害废弃物处理；实验台面需用 1000mg/L 有效氯消毒剂擦拭，作用 30 分钟，因该菌株内毒素耐热性强，需延长消毒时间以彻底破坏毒素活性。
长期存储技巧：长期保存建议采用冻干法（含 15% 脱脂乳 - 5% 蔗糖保护剂，蔗糖能提高菌体冻干存活率），4℃干燥避光存放，保质期可达 3~4 年；若采用 - 80℃甘油冷冻法，需将增菌后的菌液与 40% 无菌甘油按 2:1 比例混合（甘油终浓度约 13.3%，避免浓度过高导致菌体脱水），分装为 1mL / 支的冻存管，快速放入 - 80℃冰箱冷冻（避免缓慢冷冻形成冰晶损伤菌体）。存储时需单独存放于双锁生物安全冰箱，与非致病性菌株严格分区，标签注明 “高致病性沙门氏菌（ATCC13311）”“log3 浓度” 及存储日期，建立双人双锁领用制度，每次领用需记录用途、用量及领用人，确保菌株流向全程可追溯。
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