培养基选择与制备：推荐使用麦康凯琼脂（MAC），典型菌落呈粉红色、圆形、光滑湿润（与斯皮兹泽芽孢杆菌乳白色粗糙菌落核心鉴别）；若需高浓度培养及浓度标定，可搭配胰酪大豆胨肉汤（TSB）或 LB 肉汤（营养丰富，利于菌体快速增殖至 log4 浓度）。制备麦康凯琼脂时，需注意胆盐浓度控制在 0.15%（浓度过高会抑制菌株生长，过低则无法抑制革兰氏阳性菌），灭菌后冷却至 45~50℃时加入中性红指示剂，避免高温破坏指示剂导致菌落显色异常。
复苏与浓度校准技巧：冻干菌粉复苏时，需用无菌 TSB 溶解（TSB 能提供充足氮源与碳源，促进菌体快速复苏增殖），37℃振荡培养（200rpm）8~10 小时（log4 浓度需比 log3 浓度延长 2~3 小时培养时间，确保菌体达到高浓度稳定期）。浓度校准时，采用 “梯度稀释 - 涂布计数法”：取 1mL 复苏菌液，用无菌生理盐水进行 10 倍梯度稀释至 10??、10??浓度，分别取 0.1mL 涂布于麦康凯琼脂平板，37℃培养 18~24 小时后计数。若浓度偏离 log4 级别（误差＞±0.1 log），需排查振荡转速是否不足（转速过低会导致菌体供氧不足，增殖缓慢）或稀释过程是否存在误差（建议使用带刻度的无菌吸管，每步稀释后更换吸管，避免交叉污染）。
生化特性验证操作要点：挑取麦康凯琼脂上的粉红色典型菌落，接种至乳糖发酵管（含溴甲酚紫指示剂），37℃培养 24 小时，若发酵管变黄且产生气泡（产酸产气，大肠杆菌核心生化特征），则判定为合格；同时进行靛基质试验：将菌落接种至蛋白胨水培养基，37℃培养 48 小时，加入柯氏试剂，若上层出现玫瑰红色，即为靛基质阳性，进一步确认菌株身份（与非发酵乳糖的肠道致病菌鉴别）。
安全管控等级：该菌株属非致病性菌（普通大肠杆菌，无致病性毒力基因），BSL-1 实验室即可操作，气溶胶操作（如菌液稀释、涂布）在常规超净台内进行即可，操作人员佩戴无菌手套与普通医用口罩，无需穿防护服（与斯皮兹泽芽孢杆菌安全管控等级一致，但需注意与致病性大肠杆菌区分）；实验结束后用 500mg/L 有效氯消毒剂擦拭操作台面，作用 10 分钟，无需复杂消毒流程。
废弃物处理要求：含菌培养物（如 TSB 菌液、菌落刮取物）需 121℃高压灭菌 20 分钟（普通细菌灭菌时长，无需像芽孢杆菌延长至 30 分钟），确保菌体彻底杀灭；实验耗材（如移液器吸头、培养皿）灭菌后按普通医疗废弃物处理；含菌废液灭菌后可直接排放（因无致病性，且灭菌后无活性），无需额外化学消毒步骤。
长期存储技巧：长期保存建议采用冻干法（含 10% 脱脂乳 - 5% 蔗糖保护剂，保护菌体细胞膜完整性），4℃干燥避光存放，保质期可达 3~4 年；若采用 - 80℃甘油冷冻法，需将 log4 浓度的菌液与 50% 无菌甘油按 1:1 比例混合（甘油终浓度 25%，避免菌体脱水），分装为 1mL / 支的冻存管，快速放入 - 80℃冰箱（避免缓慢冷冻形成冰晶损伤菌体）。需注意：log4 高浓度菌株冻存时，需确保菌体处于稳定期（振荡培养 10 小时后），若为对数期菌体，冻存后复苏率会下降 10%~15%。存储时可与非致病性菌株同区域存放于普通双锁冰箱，标签注明 “非致病性大肠杆菌（ATCC51813）”“log4 浓度” 及存储日期，建立领用台账，管理难度低于芽孢杆菌与致病性菌株。
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