cetrimide 琼脂上：菌落呈灰绿色、扁平状，表面光滑或略有褶皱，周围培养基因绿脓素扩散呈蓝绿色（特征性色素，与大肠杆菌粉红色菌落鉴别）；
TSA 上：菌落呈乳白色至灰绿色，边缘不整齐，培养 48 小时后直径可达 2-3mm；
液体培养（胰酪大豆胨肉汤，TSB）：呈均匀浑浊，后期因色素产生呈蓝绿色，无沉淀（与芽孢菌液体培养沉淀特性差异显著，也不同于大肠杆菌均匀浑浊无色素的特点）。
活化：取冻干菌粉，加入 2mL 无菌 TSB，涡旋振荡 1 分钟使菌粉完全溶解，35℃、200rpm 振荡培养 16 小时；
纯化：取 0.1mL 活化菌液涂布 cetrimide 琼脂平板，35℃培养 24 小时，挑取灰绿色、产色素的单菌落；
扩繁：将单菌落接种至 50mL TSB，35℃、200rpm 振荡培养 18 小时，制得浓度 10?-10? CFU/mL 的菌悬液（可通过麦氏比浊法快速校准）。
浓度校准：采用涂布计数法，取菌悬液 10 倍梯度稀释至 10??、10??，取 0.1mL 涂布 TSA 平板（3 个平行），35℃培养 24 小时计数，误差需控制在 ±0.2 log 内；
鉴别特征：
形态：革兰氏染色呈阴性短杆状（直径 0.5-1.0μm，长度 1.5-3.0μm），具单端鞭毛（显微镜下可见运动性，与无鞭毛的大肠杆菌鉴别）；
生化：氧化酶阳性（滴加氧化酶试剂 10 秒内呈紫色，与大肠杆菌氧化酶阴性鉴别）、不发酵乳糖（与大肠杆菌乳糖发酵特性鉴别）、能利用柠檬酸盐作为唯一碳源，特性稳定可重复。
个人防护：穿全包裹式防护服、戴 N95 口罩（防止菌雾吸入）及护目镜（避免菌液接触黏膜），操作前后用 75% 乙醇消毒手部；
环境消毒：实验后用 0.5% 过氧乙酸喷雾消毒生物安全柜，作用 20 分钟后擦拭，紫外灯照射 30 分钟；地面每周用 0.2% 含氯消毒剂擦拭；
废弃物处理：含菌培养物 121℃高压灭菌 30 分钟（比 ATCC8739RT10 长 10 分钟，需彻底灭活致病因子）；耗材灭菌后按医疗有害废弃物处理，不可与普通垃圾混放。
长期存储（推荐）：
冻干法：将对数期菌悬液与 12% 脱脂乳 + 6% 蔗糖保护剂 1:1 混合，冻干后密封，4℃冷藏存放，保质期 3-4 年，存活率≥85%；
-80℃冷冻法：菌悬液与 50% 无菌甘油 1:1 混合，分装冻存管，快速冻存，保质期 2-3 年（反复冻融不超过 2 次，否则会影响药敏特性）；
短期存储（1 个月内）：将菌液接种至 TSA 斜面，35℃培养 24 小时后，4℃冷藏存放，每周传代 1 次，避免菌株退化；
存储管理：单独存放于双锁生物安全冰箱的致病菌区域，与 ATCC8739RT10 等非致病菌严格分区；标签注明 “铜绿假单胞菌（ATCC27853，WDCM 00025）”“BSL-2 级”“存储日期”，实行双人双锁领用制度，领用记录需注明 “药敏质控” 或 “消毒验证” 用途，严防泄漏引发实验室感染。
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